单宁酶(Tannase)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 单宁酶(Tannase)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1542
Price: 626 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Tannase(TAN) Activity Assay Kit

产品货号

KTB1542

产品特点：

兼容植物组织、真菌、细菌等多种样本类型，适用范围广。

提供即用型 Extraction Buffer、Substrate 及 Standard，附详细样品制备与结果计算流程，实验上手快。

标准品与标准曲线双重参考，检测范围 0.3125–20 μmol/mL，数据可比性强。

96 孔 UV 微孔板微量体系，节约样本与试剂，适合高通量检测。

选择规格

48 T/48 S

¥626

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥898

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的 CheKine™ 单宁酶(Tannase)活性检测试剂盒（微量法）是一种基于比色法的微量检测体系，可在 96 孔 UV 微孔板中快速测定植物组织、真菌、细菌等生物样本中单宁酶（Tannase, EC 3.1.1.20）的活性，为细胞代谢与氧化应激研究提供可靠数据。

单宁酶（Tannase）又称鞣酸酶，是一种能够水解单宁分子中酯键与缩酚羧键的酰基水解酶，最终生成没食子酸和葡萄糖。该酶广泛分布于富含单宁的植物及多种微生物（如黑曲霉、米曲霉）中，在食品工业中用于啤酒澄清、柿子脱涩、速溶茶防混浊等场景。本试剂盒利用 Tannase 催化底物水解后释放的产物与显色体系反应，在特定波长下产生颜色变化；其吸光度与酶活性成正比，从而通过标准曲线计算样本中单宁酶的活力。

应用领域

细胞代谢研究、氧化应激机制探索、微生物酶活筛选、植物次生代谢分析以及食品工业中单宁酶工艺优化与质量控制。

产品参数

中文名称	单宁酶(Tannase)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Tannase(TAN) Activity Assay Kit
产品货号	KTB1542
检测类型	氧化应激
检测方法	比色法
试剂盒组分	• Extraction Buffer •Substrate •Standard
检测范围	0.3125-20 μmoL/mL
分子	TAN
检测指标	TAN
注意事项	• 需用96孔UV微孔板。 • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	建议收到货后避光保存于4℃，有效期为6个月。请参考说明书中各个组分的最佳保存条件进行储存。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3 个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或紫外分光光度计（能测 270 nm 处的吸光度）
96 孔 UV 板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
水浴锅、制冰机、低温离心机
无水乙醇
匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
Extraction Buffer	100 mL (48 T) 100 mL×2 (96 T)	4℃
Substrate	6.5 mL (48 T) 13 mL (96 T)	4℃，避光保存
Standard Powder	×1 vial (48 T) ×2 vials (96 T)	4℃，避光保存

Substrate：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

注意：Substrate 有毒，建议在通风橱进行实验。

Standard：临用前每管加入 1.178 mL 无水乙醇充分混匀溶解，配制成 20 μmol/mL 的标准品溶液备用。用不完的试剂可 4℃保存一周或-20℃长期保存。

标准曲线设置：按下表所示用 Extraction Buffer 将 20 μmol/mL 标准品稀释为 10、5、2.5、1.25、0.625、0.313 μmol/mL 的标准溶液。

序号	标准品体积	Extraction Buffer 体积（µL）	标准品浓度（μmol/mL）
Std.1	200 µL of 20 μmol/mL	0	20
Std.2	100 µL of Std.1 (20 μmol/mL)	100	10
Std.3	100 µL of Std.2 (10 μmol/mL)	100	5
Std.4	100 µL of Std.3 (5 μmol/mL)	100	2.5
Std.5	100 µL of Std.4 (2.5 μmol/mL)	100	1.25
Std.6	100 µL of Std.5 (1.25 μmol/mL)	100	0.625
Std.7	100 µL of Std.6 (0.625 μmol/mL)	100	0.313

注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4 小时内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1 个月。处理好的样本须当天检测。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine 货号：KTD3001 的蛋白质定量试剂盒（BCA 法）进行样本蛋白质浓度测定。

1. 植物组织：称取约 0.1 g 样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

2. 真菌或细菌：收集 500 万真菌或细菌到离心管内，用冷 PBS 清洗，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎真菌或细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30 次），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

实验步骤

1. 酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 270 nm。紫外分光光度计用去离子水调零。

2. 吸取 50 μL 样本于 EP 管中作为对照管，沸水浴 5 min，冷却至常温。

3. 样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

试剂	空白管（μL）	标准管（μL）	测定管（μL）	对照管（μL）
Extraction Buffer	200	150	100	100
不同浓度 Std.	0	50	0	0
样本	0	0	50	50（已灭活）
Substrate	0	0	50	50

混匀后 40℃水浴反应 10 min 后马上沸水浴 5 min，冷却后常温（25℃）10,000 g 离心 10 min，取上清。

在 96 孔 UV 板或微量石英比色皿中分别加入下列试剂：

试剂	空白管（μL）	标准管（μL）	测定管（μL）	对照管（μL）
上清液	10	10	10	10
Extraction Buffer	190	190	190	190

4. 混匀后测定 270 nm 下的吸光度，分别记为 A 空白、A 标准、A 测定和 A 对照，计算 ΔA 标=A 标准-A 空白，ΔA 测=A 对照-A 测定（空白管只需做 1 次，每个样本都需要设置一个对照）。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验，如果 ΔA 测大于 1.0，样本可用 Extraction Buffer 进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数；如果 ΔA 测小于 0.001，可增加样本量进行检测。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准液浓度为 y 轴，ΔA 标为 x 轴绘制标准曲线，将 ΔA 测带入标准曲线公式计算出 y（μmol/mL）。

2. 样本单宁酶含量计算

(1) 按样本质量计算

单位的定义：40℃下，每 g 组织在反应体系中每分钟减少 1 nmol PG 的酶量定义为一个酶活性单位。

单宁酶(U/g 质量)=y×1,000×F×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×n=8,000×y÷W×n

(2) 按真菌或细菌的细胞数量计算

单位的定义：40℃下，每 10⁴个真菌或细菌在反应体系中每分钟减少 1 nmol PG 的酶量定义为一个酶活性单位。

单宁酶(U/10⁴)=y×1,000×F×V 反总÷(V 样×500÷V 样总)÷T×n=16×y×n

(3) 按蛋白浓度计算

单位的定义：40℃下，每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟减少 1 nmol PG 的酶量定义为一个酶活性单位。

单宁酶(U/mg prot)=y×1,000×F×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×n=8,000×y÷Cpr×n

1,000：单位换算系数，1 μmol=1,000 nmol；F：上清液的稀释倍数，上述反应体系中 F=200 μL÷10 μL=20；V 反总：反应体系总体积，0.2 mL；W：样本质量，g；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；n：样本进一步稀释的稀释倍数；500：500 万个数量的真菌或细菌；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。