结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1373
Price: 2639 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Granule-Bound Starch Synthase (GBSS) Activity Assay Kit

产品货号

KTB1373

产品特点：

已验证多种细胞及组织样本，适用面广

微量法设计，节省样本与试剂

操作步骤简洁，实验流程标准化

显色稳定，结果重复性好

-20 ℃避光保存，有效期长达 6 个月

选择规格

48 T/48 S

¥2639

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥4398

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，可在体外条件下快速、准确地测定细胞或组织样品中结合态淀粉合成酶（GBSS）的活性，为研究细胞代谢过程中淀粉合成通路的调控机制提供可靠数据。

结合态淀粉合成酶（Granule-Bound Starch Synthase, GBSS）是淀粉合成途径中的关键限速酶，主要负责直链淀粉的延伸。在植物贮藏器官、微藻及某些微生物中，GBSS 活性直接决定直链淀粉含量，进而影响淀粉颗粒的结构与理化特性。本试剂盒利用比色法原理：GBSS 催化底物 ADP-葡萄糖将葡萄糖基转移到淀粉引物上，同时生成 ADP；ADP 进一步与试剂系统中的显色探针反应，在特定波长下产生可检测的颜色变化，其吸光度与 GBSS 活性成正比。

应用领域

本试剂盒主要应用于细胞代谢研究，适用于植物细胞、微藻、真菌及原核表达体系等细胞类样本中 GBSS 活性的定量分析，可服务于淀粉合成调控、生物燃料开发、作物品质改良及合成生物学等方向。

产品参数

中文名称	结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Granule-Bound Starch Synthase (GBSS) Activity Assay Kit
产品货号	KTB1373
检测方法	比色法
试剂盒组分	•Extraction Buffer Reagent I •Reagent ⅡA •Reagent ⅡB •Reagent ⅡC •Reagent Ⅲ •Reagent Ⅳ •Reagent Ⅴ •Reagent VI
分子	GBSS
检测指标	GBSS
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	-20℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或紫外光分光光度计（能测 340 nm处的吸光度）
96孔 UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
水浴锅、低温离心机
去离子水
匀浆器或研钵（如果是组织样本）

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

注意：Extraction Buffer有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Working Reagent II：临用前配制；Reagent IIA 48 T加入 8.4 mL ReagentⅠ，96 T加入 16.8 mL ReagentⅠ，缓慢加热，逐渐升温至煮沸使其溶解，冷却后与 Reagent II B和 Reagent II C混匀溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 2周，避免反复冻融。

Reagent III：临用前配制；48 T加入 4.8 mL ReagentⅠ，96 T加入 9.6 mL ReagentⅠ，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

Reagent IV：临用前配制；48 T加入 6 mL ReagentⅠ，96 T加入 12 mL ReagentⅠ，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

Reagent V：临用前配制；48 T加入 0.225 mL去离子水，96 T加入 0.45 mL去离子水，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

Reagent VI：临用前配制；48 T加入 0.225 mL去离子水，96 T加入 0.45 mL去离子水，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

样本制备

注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。

植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，弃上清液，在沉淀中加入 1 mL Extraction Buffer充分混匀，置冰上待测。

注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3002的蛋白质定量试剂盒（Bradford法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或紫外光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 340 nm，紫外光分光光度计用去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中操作）：

试剂	测定孔（μL）
样本	75
Working Reagent II	135

混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却

试剂	测定孔（μL）
Reagent III	75

混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10,000g，4℃离心 10 min，取上清液。下述操作在 96孔 UV板或微量石英比色皿中操作：

试剂	测定孔（μL）
上清液	150
Reagent IV	100
Reagent V	5
Reagent VI	5

3. 充分混匀，立即记录 340 nm处 10 s时吸光值 A1和 130 s时的吸光值 A2。计算ΔA=A2-A1。

注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.02可适当加大样本量。如果ΔA大于 0.6，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。若ΔA出现负值，则说明样本中不含 GBSS或已降解。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

GBSS活性的计算

A. 使用 96孔 UV板测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算：

酶活单位定义：每毫克蛋白每分钟产生 1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS (U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T×1.9=1,059×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算：

酶活单位定义：每克样本每分钟产生 1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS (U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1.9=1,059×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积，2.6×10^-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L /mol /cm；d：96孔 UV 板光径，0.5 cm；V 样：加入样本体积，0.075 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；1.9：稀释倍数；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中光径 d：0.5 cm调整为 d：1 cm进行计算即可。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。