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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，专为定量分析动植物组织、培养细胞等样本中β-半乳糖苷酶活性而设计，可在常规酶标仪上快速完成高通量检测。
β-半乳糖苷酶（β-GAL, EC 3.2.1.23）是一种广泛分布于动物、植物、微生物及培养细胞中的水解酶，可催化β-半乳糖苷键断裂并释放游离半乳糖。该酶不仅参与植物快速生长时的能量动员，还在多糖代谢、细胞壁组分更新及衰老过程中细胞壁降解等环节发挥关键作用。CheKine™ β-GAL 活性检测试剂盒利用酶促反应生成的显色产物在特定波长下的吸光度变化，实现β-GAL 活性的定量评估，为细胞代谢研究提供可靠数据。
本试剂盒主要应用于细胞代谢研究，可用于监测细胞衰老、植物组织发育、微生物代谢途径以及药物或环境因子对β-半乳糖苷酶活性的影响，为基础生物学、农业科学及药物筛选提供关键酶活数据。
| 中文名称 | β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro β-galactosidase (β-GAL) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1324 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Il •Reagent Ill •Standard |
| 分子 | β-半乳糖苷酶，β-GAL |
| 检测指标 | β-半乳糖苷酶，β-GAL |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working Reagent I：临用前配制；每支加入 1.5 mL去离子水，充分溶解待用；用不完的试剂-20℃分装避光可保存 4周，避免反复冻融。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Standard：5 μmol/mL对硝基苯酚标准液，即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
注意：Standard有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。
使用 5 μmol/mL对硝基苯酚标准液，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 40 µL 5 μmol/mL Standard | 960 | 200 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (200 nmol/mL) | 500 | 100 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (100 nmol/mL) | 500 | 50 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (50 nmol/mL) | 500 | 25 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (25 nmol/mL) | 500 | 12.5 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (12.5 nmol/mL) | 500 | 6.25 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (6.25 nmol/mL) | 500 | 3.125 |
| Blank | 0 | 500 | 0（空白孔） |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
称取约 0.1 g组织样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
注意：(1) 如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
(2) 该试剂盒提取的样本也可以适用于 KTB1323、KTB1322、KTB1015的测定。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 400 nm。可见分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿中进行）：
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） |
|---|---|---|---|
| Working Reagent I | 25 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 25 | 0 |
| Reagent II | 35 | 35 | 0 |
| 样本上清 | 10 | 10 | 0 |
| 迅速混匀，放入 37℃孵育 30 min | - | - | - |
| Standard | 0 | 0 | 70 |
| Reagent III | 130 | 130 | 130 |
3. 充分混匀，于 400 nm处测定吸光值，分别记为 A 测定、A 对照、A 标准、A 空白，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照、ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：每个测定孔需设一个对照孔，标准曲线和空白孔只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于ΔA 测定大于 200 nmol/mL的ΔA 标准，样本上清液可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. β-GAL活性的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生 1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GAL (U/mg prot)=0.233×x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每分钟产生 1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GAL (U/g 鲜重)=0.233×x÷W
V 反总：反应体系总体积，0.07 mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.01 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30 min。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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