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活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的CheKine™ β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性检测试剂盒（微量法）（CheKine™ Micro β-glucosidase (β-GC) Activity Assay Kit，货号KTB1322）是一款基于比色法设计、专为微量样本开发的酶活测定工具，可快速、便捷地检测动植物组织、细胞、细菌等多种生物样本中的β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性。
β-葡萄糖苷酶（β-GC, EC 3.2.1.21）广泛分布于动物、植物、微生物及培养细胞中，通过催化β-糖苷键水解参与多种生理过程：在纤维素糖化途径中，β-GC将纤维素二糖及寡糖进一步水解为葡萄糖；在植物香气形成中，β-GC水解萜烯类香气前体的糖苷键，释放游离态香味物质；此外，β-GC还能水解植物体内的野黑樱苷，释放氢氰酸（HCN），从而起到防御昆虫取食的作用。本试剂盒利用比色法原理，通过检测反应产物的吸光度变化，定量反映样本中β-GC的活性水平。
该试剂盒专为细胞代谢分析设计，可广泛应用于植物纤维素降解机制研究、微生物发酵工艺优化、细胞糖苷键代谢通路探索及食品风味物质生物合成等领域，为β-GC功能研究提供高效、精准的检测方案。
| 中文名称 | β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro β-glucosidase (β-GC) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1322 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent II •Reagent III •Standard |
| 分子 | β-葡萄糖苷酶，β-GC |
| 检测指标 | β-葡萄糖苷酶，β-GC |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1 个月。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent I：临用前配制；48 T加入 9.6 mL去离子水，96 T加入 19.2 mL去离子水，充分溶解待用；用不完的试剂-20℃分装避光保存 4周，避免反复冻融。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Standard：5 μmol/mL对硝基苯酚标准液，即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
使用 5 μmol/mL对硝基苯酚标准液，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 20 µL 5 μmol/mL Standard | 980 | 100 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (100 nmol/mL) | 500 | 50 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (50 nmol/mL) | 500 | 25 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (25 nmol/mL) | 500 | 12.5 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (12.5 nmol/mL) | 500 | 6.25 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (6.25 nmol/mL) | 500 | 3.125 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (3.125 nmol/mL) | 500 | 1.563 |
| Blank | 0 | 500 | 0（空白管） |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
1. 组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 细菌：收集 500万细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细菌，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
3. 血清（浆）：直接检测。若溶液有浑浊需离心后取上清进行测定。
注意：1. 如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
2. 该试剂盒的 Extraction Buffer与 KTB1324、KTB1323、KTB1015相同，该试剂盒提取的动植物组织样本也可以适用于 KTB1324、KTB1323、KTB1015的测定。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 400 nm。可见分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中进行）：
| 试剂 | 测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） |
|---|---|---|---|
| Reagent I | 120 | 0 | 0 |
| Reagent II | 150 | 150 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 120 | 0 |
| 样本上清 | 30 | 30 | 0 |
充分混匀，放入 37℃准确水浴 30 min后，立即放入 95℃水浴 5 min（盖紧，以防止水分散失），冷却后充分混匀（以保证浓度不变），8,000 g，4℃，离心 5 min，取上清液（在 1 mL微量玻璃比色皿或 96孔板中加入下列试剂）
| 试剂 | 测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） |
|---|---|---|---|
| Standard | 0 | 0 | 70 |
| 上清液 | 70 | 70 | 0 |
| Reagent III | 130 | 130 | 130 |
3. 充分混匀，室温静置 2 min后，于 400 nm处测定吸光值，分别记为 A 测定、A 对照、A 标准、A 空白，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照、ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：标准曲线和空白管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA 测定大于 0.4，样本上清液可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. β-GC 活性的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生 1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC (U/mg prot)=(x×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=x÷Cpr÷3
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每分钟产生 1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC (U/g 鲜重)=(x×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=x÷W÷3
（3）按细菌密度计算：
单位的定义：每 104个细菌每分钟产生 1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC (U/104)=(x×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=x÷500÷3
（4）按样本体积计算
单位的定义：每mL液体样本每分钟产生 1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC (U/mL)=(x×V 反总)÷(V 样÷V 样总)÷T=x÷3
V 反总：反应体系总体积，0.3 mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌总数，5×106；T：反应时间，30 min。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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