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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 细胞总铁离子含量检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，专为测定细胞样本中总铁离子含量而设计。通过简单裂解与显色反应，可在 593 nm 处读取吸光度，快速换算出细胞内铁离子浓度。
铁元素是人体必需的微量元素之一，是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及多种酶系统的核心组分，负责氧的运输与脂肪氧化。铁缺乏会导致贫血、代谢紊乱及免疫功能下降。本试剂盒利用亚硫酸钠将样本中的 Fe³⁺ 还原为 Fe²⁺，在酸性条件下 Fe²⁺ 与三吡啶基三嗪形成蓝色络合物，593 nm 处出现特征吸收峰；吸光度变化与总铁离子浓度成正比，从而实现对细胞总铁含量的定量分析。
应用领域：细胞代谢研究、铁稳态与铁死亡机制探索、药物对细胞内铁水平影响的评估等细胞生物学实验。
| 中文名称 | 细胞总铁离子含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Cell Total Iron Ion Content Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1114 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Reagent I •Standard |
| 检测范围 | 0.78-100 nmol/mL |
| 灵敏度 | 0.78 nmol/mL |
| 分子 | 细胞总铁离子 |
| 检测指标 | 细胞总铁离子 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。为避免污染，建议将 Reagent I 分装后使用。
Standard：临用前配制；每瓶加入 830 μL Extraction Buffer充分溶解，即 10 µmol/mL Fe3+标准品；用不完的试剂 4℃避光保存可稳定 1个月。使用 10 µmol/mL Fe3+标准品，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | Extraction Buffer体积（μL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 10 μL of 10 µmol/mL Standard | 990 | 100 |
| Std.2 | 500 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 500 | 50 |
| Std.3 | 500 μL of Std.2 (50 nmol/mL) | 500 | 25 |
| Std.4 | 500 μL of Std.3 (25 nmol/mL) | 500 | 12.5 |
| Std.5 | 500 μL of Std.4 (12.5 nmol/mL) | 500 | 6.25 |
| Std.6 | 500 μL of Std.5 (6.25 nmol/mL) | 500 | 3.13 |
| Std.7 | 500 μL of Std.6 (3.13 nmol/mL) | 500 | 1.56 |
| Blank | 0 | 500 | 0 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。
细胞：收集 1,000万细胞到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 0.5 mL Extraction Buffer，置冰上裂解 10 min，每 2 min上下颠倒混匀一次，裂解完成后置冰上待测。
注意：1. 本试剂盒提取液不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白含量，用去离子水重新提取样本后进行蛋白浓度测定。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
2. 为避免铁污染，所有的样本处理和转移操作不要使用铁制器具。如有需要，可用 1%稀盐酸浸泡处理所用器具 4 h。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 593 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中操作）：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 200 |
| Standard | 0 | 200 | 0 |
| Extraction Buffer | 200 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 100 | 100 |
充分混匀，37℃孵育 10 min，流水冷却至室温，进行以下操作：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 氯仿 | 100 | 100 | 100 |
3. 充分涡旋震荡 2 min，10,000 g，室温离心 5 min，小心吸取上层无机相 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 593 nm处吸光值空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：1. 空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.004可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 0.7，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
2. 每次检测不要超过三个样本，反应完成后需立即完成吸光值检测，避免造成实验误差。
3. 氯仿会腐蚀 96孔板，所以在吸取上层无机相时注意不要吸到下层氯仿。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. 总铁离子含量的计算：
（1）按蛋白浓度计算
总铁离子(nmol/mg 蛋白)=(V 样×x)÷(V 样×Cpr)=x÷Cpr
（2）按细胞数量计算：
总铁离子(nmol/106 cell)=(V 样×x)÷(n×V 样÷V 样总)=0.5x÷n
V 样：加入反应体系中样本体积，0.2 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，0.5 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；n：细胞数量，以 106计。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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