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活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的活细胞示踪试剂盒（绿色荧光）（Live Cell Tracking Kit, Green Fluorescence）是一套专为活细胞设计的绿色荧光标记系统，通过CellTracker Green探针实现对细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化及侵袭等动态过程的长时程可视化追踪。
细胞运动和定位研究需要能够在活细胞中长期存留且无毒的示踪工具。CellTracker Green是一种可透过活细胞膜的疏水性探针，进入细胞后被胞内酯酶水解为亲水性荧光产物，从而牢固结合于胞质并随细胞分裂传递至子代细胞，但不向邻近细胞扩散。该探针在488 nm激发光下发射绿色荧光，信号可稳定保持至少一周，兼容流式细胞仪与荧光显微镜平台，为连续监测细胞行为提供可靠手段。
该试剂盒适用于细胞状态分析场景，可用于研究肿瘤细胞迁移与侵袭、免疫细胞趋化、干细胞分化定位、药物对细胞运动能力的影响等，为细胞生物学、肿瘤学、免疫学及药物筛选提供可视化数据支持。
| 中文名称 | 活细胞示踪试剂盒(绿色荧光) |
| 英文名称 | Live Cell Tracking Kit (Green Fluorescence) |
| 产品货号 | KTA1002 |
| 试剂盒组分 | • 活细胞示踪染料：CellTracker Green • 实验缓冲液 (5×) |
| 注意事项 | 使用前，请在室温下融化各个组分 |
| 保存建议 | 请参阅说明书中各个组分的存储条件。自发货之日起，在推荐温度下至少稳定12个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Cell Tracker Green：冰上操作，避光分装保存，避免反复冻融。
1×Assay Buffer：用去离子水把 5×Assay Buffer 稀释到 1×。使用前加热到 37℃。
Staining Solution：实验开始之前，将 Cell Tracker Green 与 Assay Buffer 以 1:1000 的比例稀释到 1× 中。相应地扩大剂量以进行大样本量测定。使用前避光并预热至 37℃。
对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定 Cell Tracker Green 的最终浓度。通常，长期染色（超过约 3 天）或使用快速分裂的细胞将需要 1:500 的稀释度以使染料浓度加倍。对于较短的实验（例如生存力测定），可能需要使用浓度低至 1:5000 稀释的染料。为了维持正常的细胞生理状态并减少潜在的伪影，应将染料的浓度保持在尽可能低的水平。
1.
用所需的方法处理细胞，并建立平行对照组；
注意：平行对照组建议：未染色的细胞（即不加 Cell Tracker Green 与 Assay Buffer 的细胞），用 PBS 悬浮；
2.
对于非贴壁细胞，通过离心（4℃，300 g，5 min）收集 0.5-1×106 个细胞。用预冷的 PBS 洗涤两次，并丢弃 PBS。对于贴壁细胞，首先使用胰蛋白酶（不含 EDTA）消化细胞，然后离心；
3.
将细胞沉淀重悬于 500 μL Staining Solution 中；
4.
在黑暗条件下，37℃孵育细胞 15-30 min；
5.
以 500 g 离心细胞，并弃去上清液；
6.
沉淀重悬在新鲜的预热培养基中，再孵育细胞 30 min，以确保与探针完全接触，并再次用 PBS 洗涤细胞；
7.
以 5×105 到 1×106 细胞/mL 的密度将细胞沉淀重悬在预热的 PBS 中，并立即使用 FL1 通道（通常为 FL1），通过流式细胞仪分析细胞。
1.
对于非贴壁细胞：按照步骤 A.1 到步骤 A.7 进行流式细胞术，将步骤 A.7 的细胞悬液放在载玻片上。用玻璃盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤光片通过荧光显微镜分析细胞。如果要固定和透化细胞，请继续执行步骤 B.3。
2.
对于贴壁细胞：建议的方案如下
(1)
用 24 孔培养皿直接培养细胞。染色前，在 37℃ CO2 培养箱中培养至少 24 h；
(2)
用所需的方法处理细胞；
(3)
用 PBS 洗涤细胞两次并丢弃 PBS；
(4)
向细胞中加入 0.5 mL Staining Solution，并在黑暗中于 37℃孵育 15-30 min；
(5)
弃去上清液，换上预热的新鲜生长培养基，然后在黑暗中于 37℃下再孵育 30 min；
(6)
用 PBS 或适当的缓冲液洗涤细胞两次。如果要固定和透化细胞，请继续进行步骤 B.3；
(7)
使用合适的滤光片进行观察。
3.
固定和透化
(1)
使用含醛的固定剂进行固定。通常，我们使用 3.7% 甲醛在室温下将细胞固定 15 min；
(2)
固定后，用 PBS 洗细胞 3 次；
(3)
固定后，如果随后要用抗体检测细胞，应将其在冰冷的丙酮中孵育 10 min 以使细胞通透，通透后，用 PBS 洗细胞 3 次。
A: 该活细胞示踪试剂盒适用于监测细胞移动、 定位、增殖、迁移等，推荐使用KTC011001和KTA1001。
A: 染色之后的活细胞状态良好的情况下会按照周期进行分裂，染料均分到下一代细胞中，经过多次分裂，细胞中的荧光染料含量就会比较低，显微镜观察就不明显。
A: 可以，该染料无毒，不影响细胞存活和形态变化。
A: Cell Tracker Green探针可以识别活细胞，并进行染色，活细胞染色率可达95%以上。
A: 不可以的，该染料是活细胞通过被动扩散进入细胞，与细胞内蛋白共价结合，是一种长效细胞示踪染料。这些荧光产物只能积聚在具有完整细胞膜的细胞中，因此死细胞无完整细胞膜不能被染色。但是活细胞被染色之后，可以由甲醛或 Glutaric dialdehyde 固定。
A: 可以，该试剂盒用于活细胞失踪，用荧光显微镜或者流式细胞仪定量即可得到细胞活力。
A: 该试剂盒运用一种活细胞荧光示踪探针，可以通过被动扩散进入细胞，与细胞内蛋白共价结合，是一种长效细胞示踪染料。一旦进入细胞，非荧光性的染料会被胞内酯酶水解，产生绿色荧光。这些荧光产物只能积聚在具有完整细胞膜的细胞中，因此死细胞无完整细胞膜不能被染色。该染料对 pH 变化不敏感，可以由甲醛或 Glutaric dialdehyde 固定。
杂志名称: Materials Today Bio | 作者: Wu, Zimei, et al.
IF: 10.200 | 发表时间: 2025
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