彗星法实验通关秘籍：超实用经验大放送
在生命科学研究中，利用彗星法 DNA 损伤分析试剂盒（3 孔载玻片）检测 DNA 损伤，是探索细胞奥秘的关键一步。但实验过程中，稍有不慎就可能影响结果准确性。下面就来分享一些亲测有效的经验。
样本处理：细节是成败关键
处理细胞系样本时，要确保细胞处于对数生长期，此时细胞活力强，对损伤刺激反应灵敏，实验结果更可靠。比如培养 HeLa 细胞，在细胞密度达到 70%-80% 融合度时进行后续操作最佳。传代时动作要轻柔，避免过度吹打造成细胞机械损伤，影响 DNA 本底。
原代细胞来之不易，从组织中分离时，消化酶的选择和浓度很重要。以肝脏原代细胞为例，用 0.25% 的胰蛋白酶消化 10-15 分钟较为合适，既能充分分离细胞，又不会过度损伤细胞。分离后尽快进行实验，减少细胞在体外的应激时间。
对于血液样本，采集后要及时处理，防止血细胞代谢变化影响 DNA 损伤情况。离心获取白细胞时，转速控制在 1500-2000 转 / 分钟，5-10 分钟为宜，过高转速可能导致细胞破裂。
组织样本处理繁琐，消化成单细胞悬液时，要不断轻柔吹打，确保细胞分散均匀。可以将组织剪碎后再消化，提高消化效率。消化后用滤网过滤，去除未消化的组织碎片。
试剂使用：严格规范保活性
试剂盒中的试剂对温度、光照敏感。裂解液、电泳缓冲液等要保存在 2 - 8℃，使用前提前半小时取出平衡至室温，避免温度过低导致结晶或成分变化。染色剂要避光保存，使用时避免长时间暴露在光线下，否则荧光强度会减弱，影响观察效果。
添加试剂时，移液器要校准准确，保证每孔试剂添加量一致。特别是低熔点琼脂糖溶液，添加量不均会导致凝胶厚度不同，影响电泳效果。
实验操作：精准操作保质量
铺胶时，动作要迅速且平稳，避免产生气泡。将细胞与低熔点琼脂糖混合液滴加到 3 孔载玻片上后，轻轻晃动载玻片，让混合液均匀分布。若有气泡，可用针尖轻轻挑破。
电泳环节，电压和时间要根据样本类型和损伤程度调整。一般来说，细胞系样本用 20-30V 电压，电泳 20-30 分钟；原代细胞和组织样本可能需要适当降低电压、延长时间。
结果分析：科学严谨得结论
在荧光显微镜下观察时，要随机选取多个视野，每个样本至少观察 100 个细胞，保证数据的代表性。使用图像分析软件测量彗星参数时，要统一测量标准，排除异常图像。多次重复实验，计算平均值和标准差，结果重复性好才能下结论。
掌握这些经验，能让彗星法实验少走弯路，更高效地获取准确可靠的 DNA 损伤检测结果，助力科研一路畅通。 要是你在实验中还有其他问题，欢迎随时交流。
