细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK-8法）实验注意事项
细胞培养与接种
· 细胞状态：确保使用处于对数生长期、生长状态良好的细胞进行实验。细胞应形态正常、贴壁良好（针对贴壁细胞）、无明显杂质和污染。对于复苏后的细胞，建议传代 2-3 次后再用于实验，以使其恢复到稳定的生长状态。
· 细胞计数与接种密度：准确进行细胞计数，根据细胞类型和实验目的确定合适的接种密度。接种密度过低，细胞可能生长缓慢，影响实验周期和结果准确性；接种密度过高，细胞可能过早接触抑制，导致结果偏差。一般来说，可先进行预实验来确定最佳接种密度。
· 接种均匀性：接种细胞时，要确保细胞在培养板中均匀分布。可在接种后将培养板在水平桌面上轻轻晃动或十字交叉式晃动，使细胞均匀分散，但要避免剧烈振荡导致细胞聚集。
试剂准备与保存
· 试剂盒保存：CCK-8 试剂盒应保存在 4℃冰箱中，避免阳光直射。不要将试剂盒暴露在高温或潮湿的环境中，防止试剂变质。
· 试剂稳定性：CCK-8 试剂应在有效期内使用，避免使用过期试剂。使用前应检查试剂是否有变色、沉淀或浑浊等异常现象，如有则不能使用。
· 避免污染：吸取试剂时，应使用无菌吸头，避免将细菌或其他杂质带入试剂中。每次使用后要及时将试剂瓶盖拧紧，防止试剂被污染。
实验操作
· 孵育时间与条件：细胞接种到培养板后，需在合适的培养条件下孵育，通常为 37℃、5% CO₂的培养箱中。不同细胞系的最佳孵育时间可能不同，一般为 24-72 小时，具体应根据预实验结果和细胞生长特性来确定。
· CCK-8 试剂加入量：按照试剂盒说明书的要求准确加入 CCK-8 试剂。加入量过少可能导致显色不充分，影响检测灵敏度；加入量过多则可能会稀释细胞培养液，改变细胞微环境，进而影响细胞活性和实验结果。
· 孵育时间与避光：加入 CCK-8 试剂后，需继续孵育一段时间以使反应充分进行，一般为 1-4 小时。孵育过程中应注意避光，因为光照可能会影响 CCK-8 试剂的稳定性和反应结果。可将培养板放入不透光的盒子或用锡箔纸包裹。
· 避免气泡产生：在加入 CCK-8 试剂和进行后续检测时，要避免产生气泡。气泡可能会干扰酶标仪的读数，导致结果不准确。如果有气泡产生，应轻轻敲击培养板使气泡排出。
结果检测与分析
· 酶标仪设置：使用酶标仪检测吸光度时，应根据 CCK-8 试剂盒的说明书设置正确的检测波长，一般为 450nm，参考波长为 630nm。同时，要确保酶标仪的光路系统清洁，无灰尘或杂质，以免影响检测结果的准确性。
· 读数时间：应在规定的时间内进行读数，一般在加入 CCK-8 试剂孵育结束后立即读数。读数时间过长可能会导致吸光度值发生变化，影响结果的准确性。
· 数据处理与分析：实验应设置多个复孔，一般不少于 3 个，以减少实验误差。对实验数据进行统计分析时，要注意数据的正态性和方差齐性，选择合适的统计方法，如 t 检验、方差分析等。同时，要结合实验目的和实际情况，对结果进行合理的解释和分析。
