葡萄糖含量检测试剂盒实验解决方案
| 中文名称 | 货号 | 规格 |
| CheKine™ 葡萄糖含量检测试剂盒（微量法）/CheKine™ Micro Glucose Assay Kit | KTB1300 | 96T/192T |
自备耗材·酶标仪或可见光分光光度计（能测630 nm处的吸光度）及水浴锅·96孔板或微量玻璃比色皿·低温离心机、水浴锅·可调节式移液枪及枪头·去离子水、PBS·匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备o-Toluidine Reagent: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。注意：o-Toluidine Reagent有毒性，实验时请佩戴口罩手套等防护措施。Glucose Standard (300 mg/dL): 即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。Standard设置：按下表所示，用去离子水将Glucose Standard 300 mg/dL稀释为300、200、100、50、20、10、4 mg/dL的标准溶液。
序号 | 300 mg/dL标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（mg/dL） |
Std.1 | 150 | 0 | 300 |
Std.2 | 100 | 50 | 200 |
Std.3 | 50 | 100 | 100 |
Std.4 | 25 | 125 | 50 |
Std.5 | 10 | 140 | 20 |
Std.6 | 5 | 145 | 10 |
Std.7 | 2 | 148 | 4 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在4 h之内使用。
样本制备注意：建议使用新鲜样本。如果不能马上进行该项实验，样本可在储存-80℃一个月。1.动物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL PBS，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心5 min，取上清液，置冰上待测。2.植物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL PBS捣碎，冰浴超声波破碎5 min（功率20％或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），12,000 g，4℃离心5 min，取上清液，置冰上待测。3.细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1 mL PBS，冰浴超声波破碎细胞或细菌5 min（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），然后12,000 g，4℃离心5 min，取上清液，置冰上待测。4.血浆，血清和尿液（和其他生物液体）：直接检测。
实验步骤1.酶标仪或可见光分光光度计预热30 min以上，调节波长到630 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。2.操作表（下述操作在EP管中操作）：
试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
上清液 | 0 | 0 | 25 |
Standard | 0 | 25 | 0 |
去离子水 | 25 | 0 | 0 |
o-Toluidine Reagent | 500 | 500 | 500 |
3.混匀，在沸水浴中加热8 min，冷水浴（4℃）中冷却4 min。取200 µL到96孔板或微量玻璃玻璃比色皿，检测630 nm处吸光值。空白孔记为A空，标准孔记为A标、测定孔记为A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。注意：空白孔只需测定1次。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本的ΔA测高于300 mg/dL标准品值，将样本用去离子水进行稀释后，再进行实验。结果需乘以稀释系数(n)。如果样本的ΔA测低于4 mg/dL标准品值，可提高样本量。
结果计算
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线。
2. Glucose浓度的计算
将样本的ΔA测代入方程得到y值（mg/dL）。
(1) 按样本鲜重计算
Glucose含量(mg/g 鲜重)=y÷100×V样÷(W×V样÷V样总) ×n=y÷100÷W×n
(2) 按样本体积计算
Glucose含量(mg/dL)=y×V样÷V样×n=y×n
(3) 按细胞或细菌数量计算
Glucose含量(mg/104)=y÷100×V样÷(500×V样÷V样总)×n=y÷50,000×n
V样：加入样本体积，0.025 mL；100：1 dL=100 mL；W：样本质量，g；V样总：加入PBS体积，1 mL；n：样本稀释倍数；500：细胞或细菌总数，500万。
换算：1 mg/dL葡萄糖等于55.5 µM，0.001%或10 ppm。
典型的血清/血浆葡萄糖值：70-110 mg/dL。
结果展示
典型标准曲线
ΔA630
Figure 1. 葡萄糖检测的标准曲线，以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
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