亚科因丙二醛含量检测试剂盒操作流程

中文名称	货号	规格
CheKine™ 脂质过氧化（丙二醛）含量检测试剂盒（微量法）/CheKine™ Micro Lipid Peroxidation (MDA) Assay kit	KTB1050	48T/96T

原理氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛（MDA）。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质过氧化的水平。脂质过氧化可能导致许多疾病的发生，包括动脉粥样硬化、糖尿病和阿尔茨海默症。CheKine™ 脂质过氧化（丙二醛）含量检测试剂盒（微量法）为检测各种样品中的丙二醛提供了一种方便的工具。丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）缩合，生成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其最大吸收波长在 532 nm，进行比色后可估测样本中 MDA 的含量。同时测定 600 nm 下的吸光度，主要是消除蔗糖的干扰，利用532 nm 与 600 nm 下的吸光度的差值，计算 MDA 的含量。
产品展示图
自备耗材·酶标仪或可见分光光度计（能测 532 nm 和 600 nm 处的吸光度）·96 孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头·水浴锅、离心机·去离子水·匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备Extraction Buffer: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Cell Extraction Buffer: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。 Reaction Mix: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。如果有沉淀形成，70℃水浴至沉淀溶解。
 样本制备1. 动植物组织：称取 0.1 g，加入 1 mL 预冷的 Extraction Buffer，将样本冰上进行匀浆，然后 13,000 g，4℃离心 10 min，取上清液做进一步分析。2. 细胞：收集 1×107 个细胞，用冷 PBS 清洗细胞后，离心后弃上清，加入 0.5 mL 预冷的 Cell Extraction Buffer，冰浴裂解细胞 5-10min，每 3 min 混匀一次，然后 13,000 g，4℃离心 10 min，取上清液做进一步分析。3. 细菌：收集 1×107个细菌，用冷 PBS 清洗细菌后，离心后弃上清，加入 0.5 mL 预冷的 Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30 次），然后 13,000 g，4℃离心 10 min，取上清液做进一步分析。4. 血清、血浆、尿液：可直接用来检测，如果有必要，建议将样本稀释成不同的浓度后，再进行检测。注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine 货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA 法）进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min 以上，可见分光光度计用去离子水调零。2. 在 EP 管中按照如下方式加样：

试剂	空白管（μL	测定管（μL）
Reaction Mix	300	300
去离子水	100	0
样本	0	100

3. 充分混匀，95℃水浴中孵育 30 min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10,000 g，25℃离心 10 min。4. 吸取 200 µL 上清液到 96 孔板或微量玻璃比色皿，测定 532 nm 和 600 nm 处吸光值，计算ΔA=A532-A600，ΔΔA 测=ΔA 测-ΔA 空（空白管只需做 1 管）。注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验，如果ΔΔA 测测大于 1.0，样本可用 Extraction Buffer 进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数；如果ΔΔA 测测小于 0.001，可增加样本量进行检测。
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