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产品解读 2024-02-28 阅读

彗星实验如何做?

彗星实验又称单细胞凝胶电泳实验,是由Ostling等研究者于1984年首次提出的一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。

彗星实验(Comet assay)是一种在单细胞水平上检测DNA损伤的技术。当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中,而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。电泳过程中,如果DNA没有损伤,则将停留在原位,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾出现。如果DNA受损,断裂的碎片进入到凝胶中,在电场的作用下,DNA碎片离开原位向阳极迁移,形成拖尾。

该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时,这种技术只需要少量细胞。

实验步骤

  1. 制备单细胞悬浮液,在 37℃ 条件下,悬浮液与低熔点琼脂糖(LM琼脂糖)混合;
  2. 将琼脂糖、细胞混合物涂布在预处理的载玻片上;
  3. 4℃条件下用裂解液处理30-60min或过夜,裂解液由去垢剂及高盐溶液组成,可去除多余的细胞膜及组蛋白;
  4. 将载玻片浸入电泳溶液中;
  5. 进行凝胶电泳,随后,中和载玻片,待LM琼脂糖完全干燥后,用荧光染料染色,并于荧光显微镜下观察DNA损伤程度。

产品优势

  • 试剂齐全可靠:提供特色涂层多孔彗星玻片,增加凝胶与载玻片粘附力,有效降低脱胶风险

  • 操作简便:无需用不同熔点琼脂糖繁琐铺胶,可快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤;

实验效果展示

Fig.用Abbkine 彗星试剂盒检测Jurkat细胞的DNA 损伤,并和A品牌进行比较。Abbkine 彗星试剂盒检测不仅步骤更简便,省时高效,且荧光较亮,样本不易脱落,可形成稳定鲜亮的结果。

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