CK肌酸激酶活性检测试剂盒怎么选？从样本类型到仪器条件的选购要点

做肌肉损伤、心肌损伤或能量代谢相关实验时，经常会用到肌酸激酶（CK）活性检测。

CK（EC 2.7.3.2）主要存在于心脏、骨骼肌和脑等组织中，参与肌酸与ATP之间的磷酸基转移，在细胞能量供应、肌肉收缩和ATP再生过程中发挥重要作用。

对于需要检测CK活性的科研人员来说，选购试剂盒时通常要考虑几个实际问题：

• 手里的组织、细胞或血清样本能不能测？

• 实验室的酶标仪是否支持340 nm检测？

• 样本量够不够？一次实验能测多少个样本？

• 测出来的CK活性该怎么计算，结果用什么单位表示？

这些问题最好在购买前确认。

下面以 CheKine™ CK肌酸激酶活性检测试剂盒（微量法，KTB1012） 为例，结合样本处理、检测原理和仪器要求，介绍CK活性检测试剂盒的选购注意事项。

一、测CK之前，先分清活性检测和蛋白含量检测

虽然都是检测CK，但CK活性和CK蛋白含量不是一回事。

CK活性检测关注的是酶的催化能力，通常通过一定时间内的反应速率计算酶活性。

CK蛋白含量检测关注的是样本中CK蛋白的多少，检测目的与活性测定有所不同。

例如，在肌肉损伤研究中，如果想了解不同处理组的CK催化活性是否存在差异，可以考虑CK活性检测试剂盒。

如果实验重点是比较CK蛋白表达量，则需要选择相应的蛋白检测方法。

KTB1012属于CK活性检测试剂盒，采用偶联酶反应，通过340 nm处吸光度随时间的变化计算CK活性。

二、先看样本类型：组织、细胞和血清能不能测？

样本是否适用，是选购时首先需要确认的条件。

KTB1012说明书列出的适用样本包括：

动物组织、细胞和血清。

不同样本的前处理方法不一样，准备实验时可以参考下表。

其中，细胞样本的超声破碎条件为：功率20%或200 W，超声3 s、间隔7 s，重复30次，总过程约5 min。

如果样本属于血浆或其他特殊类型，不建议直接套用上述流程。可以先联系亚科因技术人员，确认样本兼容性和需要调整的处理条件。

样本保存也要提前考虑

CK活性会受到样本保存和处理条件的影响。

说明书推荐使用新鲜样本。暂时无法检测的完整细胞或分装组织块，可在-80℃条件下保存1个月，但冻存和后续处理仍可能影响酶活。

血清样本需要特别留意。由于血清中的CK不够稳定，采集后建议尽快测定；按说明书条件，4℃避光保存可稳定24 h。

组织和细胞提取后的上清应置于冰上待测，尽量减少长时间放置和反复冻融。

对于需要分批采集样本的实验，最好提前安排采样、提取和检测时间，尽可能统一各组样本的处理条件。

组织和细胞样本要不要测蛋白浓度？

这取决于最终的结果如何表示。

如果打算按照组织质量或细胞数量计算CK活性，需要记录取样质量或细胞数量。

如果准备按照蛋白浓度归一化，则还需要测定总蛋白浓度。

例如，KTB1012可配合亚科因 BCA蛋白质定量试剂盒（KTD3001） 测定蛋白浓度，随后将CK活性换算为U/mg prot。

准备样本时记得预留用于BCA检测的上清，避免CK测完后才发现没有剩余样本。

三、仪器能不能测340 nm？购买前一定要确认

不少实验室配有酶标仪，但并不是每台酶标仪都支持340 nm检测。

KTB1012的反应体系通过NADPH在340 nm处的吸光度变化反映CK活性，因此340 nm检测能力是仪器选型中的必要条件。

购买前需要确认以下设备和耗材。

使用前，检测仪器需要预热30 min以上。

如果使用酶标仪，应确认仪器能否在检测过程中维持37℃。如果使用紫外分光光度计，则需要按说明书要求调零，并使用适合340 nm检测的比色皿。

为什么要用UV酶标板？

普通透明酶标板不一定适合340 nm紫外吸光度检测。

如果实验室只有常规可见光检测用的96孔板，建议提前确认是否需要另购UV板。

此外，使用微量石英比色皿时，还要考虑光程变化对计算公式的影响。

KTB1012的96孔UV板计算公式采用0.5 cm光程；使用1 cm光程的微量石英比色皿时，需要按说明书重新调整计算。

因此，购买前最好同时确认仪器波长、控温条件和检测耗材，不要等试剂盒到货后才发现设备不匹配。

四、CK活性是怎么测出来的？读数方式会影响实验安排

了解检测原理，有助于判断试剂盒是否适合自己的实验。

KTB1012采用偶联酶反应检测CK活性。

反应过程中，CK催化磷酸肌酸与ADP生成肌酸和ATP；随后，己糖激酶催化ATP与葡萄糖生成6-磷酸葡萄糖，再由6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化生成NADPH。

NADPH在340 nm处有特征吸收。

在规定的反应条件下，通过测定NADPH吸光度的增加速度，就可以计算CK活性。

每孔需要多少样本？

以96孔UV板检测体系为例，每孔总体积为200 μL。

Working Solution由Working Reagent Ⅰ与Reagent Ⅱ按1:1混合配制，现用现配。加入检测体系前，Working Solution需在37℃孵育2 min。

按照2026年8月11日版说明书，反应体系混匀后，在37℃条件下于340 nm分别记录5 min和10 min的吸光度，记为A₁和A₂。

空白孔按说明书做1次即可。

样本多的时候，能不能一次全部检测？

需要结合仪器操作方式安排。

CK活性通过单位时间内的吸光度变化计算，因此读数时间和反应温度都会影响最终结果。

KTB1012说明书不推荐同时检测过多样本。

如果一次需要测几十个样本，建议提前评估加样速度、混匀时间和仪器读数能力，合理分批检测，尽量保持不同样本的反应时间一致。

对于样本量有限的实验，还要考虑复孔安排。

例如，血清每个测定孔需要40 μL。如果计划每份样本做两个复孔，仅检测孔就需要80 μL血清，还没有考虑预实验和其他检测项目的消耗。

因此，选购48 T还是96 T规格，最好结合实际检测孔数计算，不能只看样本数量。

五、检测结果太高或太低怎么办？先看ΔA

CK活性不是直接读取某个吸光度数值，而是根据两个时间点之间的吸光度变化计算。

计算时还需要扣除空白孔本身的变化。

公式为：

ΔA测定 =（A₂测定－A₁测定）－（A₂空白－A₁空白）

按照2026年8月11日版说明书，建议关注以下情况。

1. ΔA测定大于0.8

如果吸光度变化过大，可以使用Extraction Buffer适当稀释样本后重新测定，也可以减少提取时使用的样本量。

如果采用了稀释处理，计算原始样本活性时，需要按实际稀释情况进行修正。

2. ΔA测定小于0.05

如果吸光度变化过小，可根据样本情况适当提高取样量，并重新评估检测条件。

对于CK活性可能较高的肌肉组织样本，可以在预实验中设置不同的稀释条件，找到更合适的检测范围。

ΔA为0.05–0.8，相当于多少CK活性？

以血清样本为例。

按照该版本说明书中96孔UV板的计算公式：

CK（U/mL）= 321.5 × ΔA测定

将0.05和0.8代入，得到的结果约为：

16.08–257.20 U/mL。

需要说明，这只是根据建议的ΔA范围换算出的血清活性区间，不能直接当成试剂盒经过独立验证的检测限或线性范围。

对于组织和细胞样本，还需要结合组织质量、细胞数量或蛋白浓度计算，不宜直接套用这一血清结果区间。

六、CK活性结果用什么单位？不同样本的计算方式不一样

CK活性检测完成后，最终结果可以根据样本类型和实验目的，按不同方式表示。

KTB1012提供了按血清体积、组织质量、蛋白浓度及细胞数量计算的公式。

这些公式采用该试剂盒说明书中的酶活力定义：在37℃、pH 7.0条件下，每分钟生成1 nmol NADPH对应一个酶活力单位，再按照相应的样本量归一化。

以下公式适用于该版本说明书规定的96孔UV板检测体系。

细胞样本中，如果取样量为5×10⁶个细胞，则N=500。

这些计算方式不建议随意混用。确定检测方案时，应提前想好采用哪一种归一化方式，并记录对应数据。

举个例子：血清CK活性怎么算？

假设某份小鼠血清测得：

• A₁测定 = 0.670

• A₂测定 = 0.907

• A₁空白 = 0.052

• A₂空白 = 0.054

先计算吸光度变化：

ΔA测定 =（0.907－0.670）－（0.054－0.052）

= 0.235

再代入血清CK活性计算公式：

CK（U/mL）= 321.5×0.235

= 75.55 U/mL

这就是该血清样本按照上述实验条件计算出的CK活性。

如果需要处理较多样本的数据，也可以使用亚科因官网技术中心提供的在线计算工具，减少手动计算过程中出现的错误。

七、试剂怎么保存？下单前看看实验安排

除了检测条件，试剂的保存要求也值得提前了解。

KTB1012有48 T/48 S和96 T/96 S两种规格，主要组分如下。

不同组分的配制方式也不一样。

Extraction Buffer： 即用型，使用前平衡至室温，4℃保存。

Reagent Ⅰ： 使用前需加入去离子水充分溶解。48 T规格加入5 mL，96 T规格加入10 mL。配制后的Working Reagent Ⅰ如有剩余，应分装后于-20℃避光保存，保存期为1个月，并避免反复冻融。

Reagent Ⅱ： 即用型，4℃保存，使用前平衡至室温。

Working Solution： Working Reagent Ⅰ与Reagent Ⅱ按1:1混合，现用现配。

另外，使用试剂时还需注意：

• 试剂盒整体有效期为6个月，各组分按对应条件保存。

• Reagent Ⅰ和Reagent Ⅱ有一定刺激性，操作时做好个人防护。

• 不同批次的试剂组分不要混用。

• 实验开始前，根据说明书要求分别处理需要室温平衡、冰上保存或37℃预热的试剂。

如果实验需要持续数周，或者样本要分批测定，建议在订购前确认试剂保存条件、使用期限和预计消耗量。

八、正式实验前，为什么建议先做预实验？

对于首次使用CK活性检测试剂盒的实验室，建议不要直接把全部样本投入正式检测。

按照KTB1012说明书，可以先选择2–3个预期存在较大差异的样本进行预实验。

重点观察：

第一，吸光度变化是否合适。 检查ΔA是否处于建议范围内，有没有变化过大或过小的情况。

第二，样本是否需要稀释。 对CK活性较高的样本，提前摸索适当的稀释条件。

第三，仪器读数是否方便安排。 特别是样本量较多时，要确认加样和读数时间能否保持一致。

第四，样本量是否充足。 将正式检测、复孔、预实验和其他配套检测需要消耗的样本一并考虑。

完成预实验后，再确定正式实验的样本处理条件和检测安排，通常更容易控制操作过程中的差异。

九、购买CK活性检测试剂盒前，可以核对这张清单

这张表适合在实验设计和采购阶段使用。

如果样本类型、仪器配置或计算方式存在疑问，建议在订购前与技术支持确认，尤其要核对自己使用的产品说明书版本。

十、KTB1012相关科研文献参考

肌酸激酶活性检测可用于肌肉损伤、运动生理及相关代谢研究。

例如，Wang Ding-Rui等人在《Progress in Biochemistry and Biophysics》发表的研究：

Mechanistic Interpretation of Zheng's San Qi San Powder in Treating Skeletal Muscle Injury via Bioinformatics Prediction, Chemical Analysis and Experimental Verification

该研究围绕骨骼肌损伤展开。

根据所提供的文献使用信息，研究人员在大鼠运动后48 h采集血清，采用亚科因KTB1012检测CK活性，同时使用KTB1110检测LDH，并使用KTB1050检测比目鱼肌组织中的MDA。

对于计划开展类似研究的科研人员，这类文献可以作为实验设计参考。

不过，不同研究的动物模型、采样时间、组织处理方法和检测条件可能不同，具体实验方案仍应结合自己的研究目的确定。

文献DOI：10.3724/j.pibb.2025.0421

文献链接：https://www.sciengine.com/PIBB/doi/10.3724/j.pibb.2025.0421

十一、CK活性检测试剂盒常见问题

Q1：KTB1012可以检测血浆吗？

说明书明确列出的样本类型为动物组织、细胞和血清。血浆及其他特殊类型样本建议先与技术支持确认适用性，不建议未经验证直接套用检测流程。

Q2：实验室没有酶标仪，可以用分光光度计吗？

可以使用符合340 nm检测要求的紫外分光光度计，但需要配备合适的微量石英比色皿，并按照实际光程调整计算公式。

Q3：样本吸光度变化太大怎么办？

当ΔA测定大于0.8时，可以按说明书要求适当稀释样本后重新测定，或减少提取时使用的样本量。

Q4：ΔA太低怎么办？

当ΔA测定小于0.05时，可以考虑适当提高样本量，并通过预实验确认调整后的检测条件。

Q5：一次能测很多个样本吗？

KTB1012采用吸光度变化计算酶活性，对反应时间有要求。说明书不推荐同时测定过多样本，建议根据仪器读数方式合理分批。

Q6：48 T和96 T应该选哪个？

建议按照实际检测孔数选择。除了样本数量，还要考虑复孔、空白孔和预实验消耗。

Q7：这个试剂盒能用于临床诊断吗？

不能。CheKine™ 肌酸激酶（CK）活性检测试剂盒（KTB1012）仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

结语

选择CK活性检测试剂盒时，先确认样本类型和实验目的，再核对340 nm检测条件、样本用量及结果计算方式。

对于首次开展CK活性检测的实验，建议先做少量样本的预实验，确认检测条件后再进行正式测定。

如需了解CheKine™ 肌酸激酶（CK）活性检测试剂盒（微量法，KTB1012）的具体参数、使用方法或样本适用性，可通过亚科因官网查询产品资料，或联系技术支持：400-6800-830。

本文仅供科研实验选型及方法参考。具体实验条件、计算公式和保存要求请以所购产品随附说明书为准，产品仅供科学研究使用。