肌酸激酶(CK)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Working Solution：临用前，根据用量将 Working ReagentⅠ和 ReagentⅡ以 1:1 充分混合待用。现用现配。

试剂盒组分

样本制备

1. 动物组织

称取约 0.1 g 样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

2. 细胞

收集 500 万细胞到离心管内，用冷 PBS 清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30 次），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

3. 血清样本

直接检测。

实验步骤

1. 酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 340 nm。紫外分光光度计用去离子水调零。
2. Working Solution 于 37℃孵育 2 min。
3. 操作表（下述操作在 96 孔 UV 板或微量石英比色皿中操作）：

迅速混匀后，于 340 nm 检测，酶标仪的温度设为 37℃，记录 10 s 和 1 min 10 s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2，计算 ΔA 测=(A 测 2-A 测 1)-(A 空 2-A 空 1)。

结果计算

A. 使用 96 孔 UV 板测定的计算公式

1. 血清 CK 活力的计算

单位的定义：37℃，pH 7.0 时，每毫升血清每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

CK (U/mL)=1,608×ΔA 测

2. 组织中 CK 活力的计算

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：37℃，pH 7.0 时，每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

CK (U/mg prot)=1,608×ΔA 测÷Cpr

(2) 按样本质量计算

单位的定义：37℃，pH 7.0 时，每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

CK (U/g 质量)=1,608×ΔA 测÷W

3. 细胞中 CK 活力的计算

单位的定义：37℃，pH 7.0 时，每 1 万个细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

CK (U/10⁴ cells)=3.2×ΔA 测

V 反总：反应体系总体积，0.2 mL=2×10^-4 L，V 提取：提取液体积，1 mL；V 样本：反应体系中上清液体积，0.04 mL；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：96 孔 UV 板直径，0.5 cm；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；500：细胞总数，500 万；10⁹：单位换算系数，1 mol=10⁹ nmol。

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中的光径 d: 0.5 cm 调整为 d: 1 cm 进行计算即可。

相关产品

免责声明

本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。