第一次买SOD试剂盒一定会问的10个问题
很多老师第一次准备上 SOD 指标时，心里多少有点打鼓：
“这套 SOD 试剂盒到底能测什么样本？”
“样本要不要冻存？冻几次会废？”
“做完 A450 之后，怎么算成 U/g、U/mL？”
这篇就用10 个最常见问题，把第一次使用 SOD 试剂盒时绕不开的坑和细节讲清楚，并以CheKine™ 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（微量法） 为例，一条条给出实操答案。
Q1：这套 SOD 试剂盒能测哪些样本？动物、植物、细胞都可以吗？
A：看说明书的第一件事，就是确认样本类型覆盖范围。
以 CheKine™ SOD kit 为例，支持常见的几大类：
- 血清、血浆
- 各类动物组织（肝、肾、心、脑、肺等）
- 植物组织
- 细胞裂解物、部分体液
一般处理思路是：
- 组织 / 植物：称重 → 加预冷裂解液 → 匀浆 / 超声 → 低温离心 → 取上清
- 细胞：计数 → PBS 洗涤 → 加裂解液 → 冰浴超声 → 离心取上清
- 血清 / 血浆：常规制备后，按推荐倍数稀释即可上板
第一次用时，建议先各取少量样本做一轮小预实验，确定稀释倍数和抑制率区间，再大规模铺开。
Q2：做 SOD 活性一定要测蛋白浓度吗？U/g、U/mL、U/mgprot 怎么选？
A：不是“必须做蛋白”，而是看你打算用什么单位。
常见几种表达方式：
- U/g 组织：按样本质量归一化，适合动物 / 植物组织
- U/mL：按体积归一化，用于血清、血浆、培养上清等
- U/mgprot：按蛋白量归一化，需要额外做 BCA 等蛋白定量
- U/10⁴ cells：用于细胞 / 细菌，按细胞数归一
如果你只是做组间相对比较，且样本量、取材方式、处理流程都高度一致，那么 U/g 或 U/mL 就足够。
如果你希望：
- 更精细地排除蛋白浓度差异带来的影响；
- 或者期刊对单位有明确要求（比如 U/mgprot），
那就要配合做蛋白定量，把 SOD 活性换算成 U/mgprot。
CheKine™ SOD kit 在说明书和配套 Excel 中，预留了多种单位的计算模板，你只需要把样本质量 / 体积 / 蛋白浓度填进去，就能自动算出对应单位的 SOD 活性。
Q3：一盒 SOD 试剂盒大概能做多少孔？样本量要怎么规划？
A：看“标称检测次数”，再留一点给预实验。
以常见的 96T 规格为例：
- 标称可测 96 孔，一般会多配一点试剂作为冗余（方便你做空白、对照和预实验）；
- 实际上，一个样本如果做 2 个技术复孔、配一套样本对照孔，加上空白等，很容易一只动物就是好几孔。
简单规划思路是：
- 先按“每个动物样本 3–4 孔”预估总孔数；
- 再加上空白、对照等杂项孔位；
- 最后给预实验预留 10%–20% 的孔。
CheKine™ SOD kit 一般在说明书中给出排板示意图，你可以直接按照示意图设计空白、样本、样本对照等，计算起来更清楚。
Q4：试剂盒到货后怎么保存？哪些需要避光、哪些可以 4℃？
A：到货先“全部进冰箱”，再按组分拆开看。
以 CheKine™ SOD kit 为例，一般建议是：
- 整体建议 −20℃ 避光保存，关键酶和 WST-8 溶液都不宜常温久放；
- 部分缓冲液（Assay Buffer、Sample Diluent 等）可以短期 4℃ 保存，但长期仍推荐 −20℃；
- 反复冻融会影响酶活，使用中尽量分装或快速操作，避免“拿出来化冻半天”。
运输方面，正规渠道一般是冰袋（蓝冰）冷链运输，收到时如果发现完全常温且长时间暴露，需要谨慎确认有效性。
CheKine™ SOD kit 在产品资料中会写明：自发货之日起，在推荐保存条件下有效期为 6 个月。可以按课题排期一次性规划几批实验。
Q5：样本当天做不完，可以冻起来吗？-20℃ 还是 -80℃？能冻几次？
A：能冻，但要冻得“干净利落”，不要反复折腾。
通用建议是：
- 短期（几天内）：4℃ 冰箱保存样本上清，有一定风险，慎用；
- 中短期（1–2 周）：建议 −80℃ 保存，有些活性下降但尚可接受；
- 更长时间：仍可以 −80℃ 保存，但一定要注意避免反复冻融。
以 CheKine™ SOD kit 的建议为例：
- 若无法立即检测，样本可在 −80℃ 下储存；
- 不建议反复冻融，尽量分装后再冻存；
- 每次解冻后应尽快完成检测。
如果你已经知道样本很珍贵，第一次离心取上清时就分装成小管，避免回来一次次“冻–化–冻–化”把 SOD 活性折腾没了。
Q6：实验温度、孵育时间怎么选？黄嘌呤试剂混浊正常吗？
A：按说明书的推荐温度和时间执行，不要随意改。
以 CheKine™ SOD kit 为例：
- 实验前，将需要在室温下使用的试剂恢复到约 25℃；
- 部分试剂（如黄嘌呤相关试剂）在低温状态下可能会看起来轻微混浊，使用前充分涡旋混匀即可；
- 孵育温度（25℃ 或 37℃）和时间（例如 30 min），都是根据体系的线性范围优化好的，不建议任意缩短或拉长。
如果你确实因为实验条件需要进行微调（比如室温偏低、孵育环境不稳定），建议：
- 先按说明书条件做一批完整对照；
- 再在小范围内试着调整 ±5℃、±5–10 min，看结果是否明显偏离。
Q7：96 孔板怎么排孔？空白、对照、复孔要怎么设计才合理？
A：合理的排板 = 数据好看 + 计算不晕。
以 WST-8 微量法的 SOD kit（如 CheKine™）为例，常见孔型包括：
- 空白（Blank）：工作液 + XO，无样本；
- 空白对照（Blank Control）：工作液，无 XO、无样本；
- 样本孔（Sample）：样本 + 工作液 + XO；
- 样本对照（Sample Control）：样本 + 工作液，无 XO。
排板小建议：
- 每个样本至少做2 个技术复孔，条件允许做 3 个更稳；
- 空白 / 空白对照至少各做 2 孔，用平均值做基线；
- 同一动物 / 同一处理组的样本尽量排在相邻孔，方便后续核对数据。
CheKine™ SOD kit 的说明书中一般会给出示意排板图，你可以直接照搬结构，只改样本编号和组别，减少出错概率。
Q8：抑制率太高 / 太低怎么办？是不是试剂盒有问题？
A：抑制率异常，绝大多数情况都出在样本和操作上。
典型情况有三种：
- 抑制率接近 100%（样本孔 A 很低）
- 样本中过量 SOD，稀释倍数太小；
- 建议：增大样本稀释倍数或减少上样量，重新测。
- 抑制率接近 0%（样本孔和空白孔差不多）
- 样本中 SOD 活性本身很低，或预处理 / 冻存不当导致酶失活；
- 建议：减少稀释、优化前处理流程，全程冰上操作。
- 抑制率乱跳（同组样本差异很大）
- 排板时加样顺序混乱、孵育时间不一致；
- 工作液不是一次性配齐，孔间浓度有差异；
- 建议：一次性配足工作液，使用多通道枪按顺序快速加样，统一开始计时。
CheKine™ SOD kit 在常见问题（FAQ）部分，对抑制率过高、过低以及重现性差都给出了对应排查思路，可以对照逐条排查，而不是本能地怀疑“是不是试剂盒坏了”。
Q9：SOD 可以和 MDA、CAT 等指标共用同一批样本吗？顺序怎么排？
A：可以共用同一批匀浆 / 上清，但建议先做“更容易受影响的”指标。
常见顺序建议：
- 先做活性敏感、对冻存不太友好的指标，比如一些酶活、ROS 探针；
- 再做 SOD、GSH-Px、CAT 等酶活性；
- 最后做相对稳定一些的 MDA、蛋白定量等。
如果你使用的是 CheKine™ 系列的：
- CheKine™ SOD 活性检测试剂盒（微量法）
- CheKine™ 脂质过氧化（MDA）含量检测试剂盒（微量法）
- 以及 GSH-Px、CAT 等相关 kit
通常可以在同一份匀浆上分装几份，按上述优先级依次使用，既能节约动物，也方便做整套氧化应激 panel。
Q10：第一次买 SOD 试剂盒，有什么“踩坑经验”可以提前避一避？
A：总结给你 5 个一句话版的提醒：
- 先做预实验，再铺开整板
- 不要一上来就把整盒试剂全部用在正式样本上，先用少量样本确定稀释倍数和抑制率区间。
- 样本前处理一定要在冰上进行
- 匀浆、超声、离心过程中尽量全程冰浴，减少酶失活。
- 工作液一次性配足，充分混匀
- 分批配、边配边用容易产生孔间差异，直接拉低重复性。
- 排板时事先画好草图，确认孔型
- 哪些是空白、对照、样本，一定要写清楚再加样，避免读完 A 值才发现排错孔。
- 善用工具：Excel 模板 / 在线计算器
- 手算 1–2 只动物还好，算几十个样本时极易抄错，配套工具可以省掉大量时间和低级错误。
CheKine™ SOD kit 在产品资料中一般会附带排板建议和计算模板，如果是实验室第一次上 SOD，完全可以以这套流程为“标准 SOP”，根据自己课题再微调。
小结 & 行动建议
- 如果你正在做SOD 试剂盒选购调研，不妨先把这 10 个问题列成清单，对照每一家产品的说明和参数，一眼就能看出谁更适合你的课题。
- 如果你已经准备开做 SOD 实验，建议先拿一套CheKine™ 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（微量法） 做一轮小规模预实验，把样本类型、抑制率和排板方式跑顺，再考虑大批量采购。
如需：
- 详细说明书 PDF；
- 配套的 SOD 活性计算 Excel 模板；
- 或者“ SOD+MDA+GSH-Px / CAT ”整套氧化应激 panel 选型建议，
可以通过官网留言、在线表单或添加技术支持微信，先拿到一套试用装和完整资料，再决定是否大规模上板，会更稳妥。
