细胞核蛋白提取试剂盒-ExKine™

Name: 细胞核蛋白提取试剂盒-ExKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTP3002
Price: 316 CNY
Availability: InStock

ExKine™ Nuclear Protein Extraction Kit

产品货号

KTP3002

产品特点：

多用途：兼容新鲜哺乳动物细胞或组织，细胞质/核蛋白交叉污染极低。

方便快捷：非变性流程，2小时内完成高活性核蛋白提取。

兼容性好：提取产物适用于Western Blot、EMSA、报告基因、酶活测定等多种下游实验。

选择规格

50 T

¥316

现货（当天发货）

200 T

¥816

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

ExKine™ 细胞核蛋白提取试剂盒（ExKine™ Nuclear Protein Extraction Kit, 货号 KTP3002）是一套专为哺乳动物细胞或组织设计的快速、非变性核蛋白分离系统。通过梯度裂解与选择性抽提，可在2小时内将细胞质蛋白与核蛋白高效分离，为后续功能研究提供高纯度、高活性的核蛋白样本。

细胞核是基因表达调控的核心场所，核蛋白（如转录因子、组蛋白修饰酶、染色质重塑复合物等）的活性与定位直接影响细胞命运。传统超声或反复冻融法易导致核蛋白降解或污染，而ExKine™ 试剂盒采用温和去垢剂与盐离子梯度裂解策略：先用细胞浆蛋白溶液A/B（CES A/B）选择性释放胞质组分，再以核提取溶液（NES）在低温下特异性抽提核蛋白，全程添加DTT与蛋白酶抑制剂，最大限度保持蛋白天然构象与活性。所得核提取物可直接用于EMSA、足迹分析、转录活性测定或作为转录因子纯化的起始材料。

应用领域

广泛应用于转录调控机制研究、表观遗传学分析、信号通路核转位验证、药物靶点筛选及肿瘤标志物发现等细胞与分子生物学实验。

产品参数

中文名称	细胞核蛋白提取试剂盒-ExKine™
英文名称	ExKine™ Nuclear Protein Extraction Kit
产品货号	KTP3002
试剂盒组分	• 细胞浆蛋白溶液A (CES A) • 细胞浆蛋白溶液B (CES B) • 核提取溶液 (NES) • DTT (500X) • 蛋白酶抑制剂 (100X)
注意事项	所有实验步骤请在2-8°C下执行。使用预冷的缓冲液和设备，并确保所有溶液都是解冻和均匀的。
保存建议	-20℃保存 12 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

工作液配制

Working Cytoplasmic Solution A (Working CESA)：使用前，立即加入 10 µL Protease Inhibitor (100×)和 2 µL DTT(500×)到 1 mL CESA中，置于冰上；4℃保存。

Cytoplasmic Solution B (CESB)：即用型；使用前，置于冰上；4℃保存。

Working Nuclear Extraction Solution (Working NES)：使用前，立即加入 10 µL Protease Inhibitor (100×)和 2 µL DTT(500×)到 1 mL NES中，置于冰上；4℃保存。

DTT (500×)：即用型；使用前，置于冰上；-20℃保存。用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。

Protease Inhibitor (100×)：即用型；使用前，置于冰上；-20℃保存。用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。

实验步骤

注意：所有的实验步骤需在 2-8℃进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。

I 细胞培养物的制备

1. 对于贴壁细胞，用细胞刮刀收获 2×10⁶个细胞，然后 500 g离心 5 min。对于悬浮细胞，500g离心 5 min。

2. 用预冷的 PBS重悬细胞沉淀，500 g离心 2-3 min，弃上清。

注意：使用移液器小心吸取上清，使细胞沉淀尽可能干燥。

3. 向细胞沉淀中加入 200 µL预冷的Working CESA后，继续步骤 III。

II 组织制备

1. 将 30-60 mg组织切成小块，放入离心管中。

2. 用预冷的 PBS清洗组织，500 g离心 5 min，弃上清。

注意：使用移液器小心吸取上清，使细胞组织尽可能干燥。

3. 用 200 µL预冷的Working CESA重悬组织。

4. 使用匀浆器匀浆组织，直至超过 90%的细胞被破坏，细胞核在显微镜下可见，继续步骤 III。

III 胞浆蛋白和核蛋白提取

1. 用涡旋仪（最高设置）剧烈涡旋样本管 5 s，使细胞完全悬浮。离心管在冰上孵育 15 min，使细胞膨胀。

2. 加入 10 µL冰冷的 CESB到离心管中，设置最高时速，涡旋 5 s，在冰上孵育 1-2 min。

3. 16,000 g，4℃离心 5 min。

4. 立即将上清液（胞浆蛋白提取物）转移到干净的预冷离心管中，置于冰上待测或在-80℃下长期保存。沉淀（含有细胞核）通常是粘性的并且是非常紧凑。

可选步骤：为了从细胞核中去除残留的胞浆蛋白，用额外的预冷Working CESA或 PBS重悬沉淀，然后重复步骤 III的 3和 4步骤 1-2遍。

5. 加入 100 µL预冷的Working NES重悬沉淀后，置于冰上，每 3-5 min涡旋 15 s，持续 30 min。避免泡沫形成。

注意：如果沉淀有分散不开的情况，可剪断吸头后用吸头反复吹打。

6. 16,000 g，4℃离心 15 min。

7. 分装上清液（核蛋白）到预冷的离心管，取出一小份用于蛋白定量检测。将其它装有核蛋白的离心管保存在-80℃。避免反复冻融。

注意：根据该实验步骤提取的核蛋白中含 NES（一种高盐缓冲液）。如果在随后的应用中需要大量的核提取物或者如果下游检测出现问题，可透析核蛋白以除去高盐物质。

注意事项

问题	可能的原因	解决办法
核蛋白浓度低	细胞沉淀未分散	充分涡旋
核蛋白浓度低	细胞核分离不完全	加入 CESB后，增加离心时间
核蛋白浓度低	使用自己配制的裂解或提取缓冲液	使用该试剂盒中提供的裂解或提取缓冲液
胞浆蛋白和核蛋白未完全分离	细胞裂解不充分	增加涡旋时间，以充分分散细胞沉淀
胞浆蛋白和核蛋白未完全分离	增加 CESB用量	-
胞浆蛋白未完全移除	-	在细胞核裂解之前，小心操作，移除胞浆蛋白
胞浆蛋白未完全移除	-	用额外的Working CESA或 PBS，重悬细胞核

常见问题

Q: 该试剂盒可以用于植物核蛋白提取吗？

A: 该试剂盒提供了一种简单、方便的方法，从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白。

Q: 纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在，可能是什么原因？应如何避免？

A: 小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物，建议客户纯化过程低温下进行，同时样本采用新鲜样本，同时纯化过程尽量在4度进行，去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 预装柱填料中是否含内毒素？

A: 本公司的纯化填料中含有微量内毒素，如果客户样品对内毒素有要求，建议用曲拉通将内毒素萃取出来，。

Q: 纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带，是什么原因？应如何解决？

A: 如果低分子量条带在原液中不存在，说明是在纯化过程中，靶蛋白出现降解，建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些，但是上样和洗脱的速度尽量不加快。

文献引用

Dehydroevodiamine targeting IKKβ to alleviate acute gastric injury via inhibiting the p65/NLRP3 axis.

杂志名称: Phytomedicine | 作者: Hu, Qichao, et al.

IF: 7 | 发表时间: 2024

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