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人促黄体生成素 ELISA定量试剂盒-EliKine™
EliKine™ Human LH ELISA Kit
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活动截止时间:2024年1月31日
                            
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活动截止时间:2024年1月31日
EliKine™ 人促黄体生成素 ELISA定量试剂盒 (EliKine™ Human LH ELISA Kit) 是一款基于双抗体夹心法的固相酶联免疫检测工具,可在 2–8 ℃冷链条件下稳定运输,用于对血清、血浆或其他生物液体中的人促黄体生成素 (LH) 进行高灵敏度、高特异性的定量分析。
促黄体生成素 (LH) 是由垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白激素,分子量约 30 kDa(UniProt ID: P01229)。LH 在卵泡刺激素 (FSH) 的协同作用下,促进卵泡成熟、触发排卵并诱导黄体形成与孕激素分泌。正常月经周期中,血清 LH 浓度呈明显波动:排卵前期 2–15 mIU/ml、排卵期 30–100 mIU/ml、排卵后期 4–10 mIU/ml;非排卵期通常维持在 5–25 mIU/ml。LH 水平 <5 mIU/ml 提示促性腺激素功能不足,常见于席汉氏综合征;若同时伴高 FSH,则预示卵巢功能衰竭。LH/FSH ≥3 为多囊卵巢综合征 (PCOS) 的诊断依据之一。本试剂盒通过特异性捕获抗体与检测抗体形成“夹心”复合物,经 HRP-TMB 显色系统放大信号,可在 450 nm 处读取吸光度,实现 2–75 IU/L 范围内的准确定量。
本试剂盒可用于生殖内分泌研究、排卵监测、多囊卵巢综合征 (PCOS) 机制探索、辅助生殖技术 (ART) 中的 LH 动态评估,以及药物干预对下丘脑-垂体-性腺轴影响的体外分析。
                                    | 中文名称 | 人促黄体生成素 ELISA定量试剂盒-EliKine™ | 
| 英文名称 | EliKine™ Human LH ELISA Kit | 
| 产品货号 | KTE6902 | 
| 反应性 | 人 | 
| 检测类型 | ELISA | 
| 检测方法 | 夹心法 | 
| 样本类型 | 血清#血浆#其它生物液体 | 
| 试剂盒组分 | • 人LH 抗体预包被微孔板 • 人LH 标准品 • 人LH检测抗体 • HRP底物A • HRP底物B • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜.  | 
                                        
| 检测范围 | 2 IU/L-75 IU/L | 
| 灵敏度 | 0.5 IU/L | 
| 基因ID | 3972 | 
| 蛋白质ID | P01229 | 
| 蛋白序列链接 | http://www.uniprot.org/uniprot/P01229 | 
| 检测指标 | LH | 
| 注意事项 | • 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存,使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中,密闭封口,4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要,推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品,建议做双孔或者三孔检测(复孔)。.  | 
                                        
| 保存建议 | 请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃;启用后的试剂盒,请参考说明书保存各个组分。 | 
| 运输条件 | 冰袋运输(蓝冰) | 
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 | 
注意:提前20 min从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。如果浓缩试剂有结晶析出,轻轻加热直至完全溶解。
1 Wash Buffer:用去离子水1:20稀释×20 Wash buffer(20×)得到1×Wash buffer,4℃保存。
Human LH Standard:在冻干标准样品瓶中加入700 µL去离子水。轻轻摇晃使粉末彻底溶解。
注意:提前20 min从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。如果浓缩试剂有结晶析出,轻轻加热直至完全溶解。
1 Wash Buffer:用去离子水1:20稀释×20 Wash buffer(20×)得到1×Wash buffer,4℃保存。
1 Wash Buffer:用去离子水1:20稀释×20 Wash buffer(20×)得到1×Wash buffer,4℃保存。
1 Wash Buffer:Human LH Standard:在冻干标准样品瓶中加入700 µL去离子水。轻轻摇晃使粉末彻底溶解。
Human LH Standard:在冻干标准样品瓶中加入700 µL去离子水。轻轻摇晃使粉末彻底溶解。
Human LH Standard:1. 血清:使用血清分离管,让样品在室温下凝结30 min,然后1,000 g离心15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存,避免反复冻融。
2. 血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后30 min内1,000 g离心15 min。立即测定或分装-20℃保存,避免反复冻融。
注意:不要使用严重溶血或脂血的标本。样品应分装保存,避免LH失活。如果样品要在24 h内使用,则可以将其储存在2至8℃。避免反复冻融。测定前,应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。
1. 血清:使用血清分离管,让样品在室温下凝结30 min,然后1,000 g离心15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存,避免反复冻融。
1. 血清:使用血清分离管,让样品在室温下凝结30 min,然后1,000 g离心15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存,避免反复冻融。
1. 血清:2. 血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后30 min内1,000 g离心15 min。立即测定或分装-20℃保存,避免反复冻融。
2. 血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后30 min内1,000 g离心15 min。立即测定或分装-20℃保存,避免反复冻融。
2. 血浆:注意:不要使用严重溶血或脂血的标本。样品应分装保存,避免LH失活。如果样品要在24 h内使用,则可以将其储存在2至8℃。避免反复冻融。测定前,应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。
1. 从板框上取下多余的板条,将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中,然后重新密封。
2. 每孔加入50 μL Human LH Standard或样品。建议所有标准品和样品做复孔。设置一个不加任何溶液空白孔。
3. 每孔加入50 μL HRP Conjugated Human Detect LH Antibody(空白孔不加)。混匀,给酶标板覆膜,37℃孵育1 h。
4. 除去每孔中的液体并洗涤,重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入250 μL 1×Wash buffer进行洗涤,然后静置10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后,倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。
5. 每孔加入50 μL HRP Substrate A和50 μL HRP Substrate B,混匀,给酶标板覆膜,37℃避光孵育15min,远离气流和其他温度波动。
6. 每孔加入50 μL Stop Solution,Stop Solution应按照与HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀,请轻轻敲击板以确保彻底混合。
7. 30 min内测定每孔450 nm处的吸光值(OD)。
1. 从板框上取下多余的板条,将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中,然后重新密封。
1. 从板框上取下多余的板条,将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中,然后重新密封。
1.2. 每孔加入50 μL Human LH Standard或样品。建议所有标准品和样品做复孔。设置一个不加任何溶液空白孔。
2. 每孔加入50 μL Human LH Standard或样品。建议所有标准品和样品做复孔。设置一个不加任何溶液空白孔。
2.3. 每孔加入50 μL HRP Conjugated Human Detect LH Antibody(空白孔不加)。混匀,给酶标板覆膜,37℃孵育1 h。
3. 每孔加入50 μL HRP Conjugated Human Detect LH Antibody(空白孔不加)。混匀,给酶标板覆膜,37℃孵育1 h。
3.4. 除去每孔中的液体并洗涤,重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入250 μL 1×Wash buffer进行洗涤,然后静置10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后,倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。
4. 除去每孔中的液体并洗涤,重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入250 μL 1×Wash buffer进行洗涤,然后静置10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后,倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。
4.5. 每孔加入50 μL HRP Substrate A和50 μL HRP Substrate B,混匀,给酶标板覆膜,37℃避光孵育15min,远离气流和其他温度波动。
5. 每孔加入50 μL HRP Substrate A和50 μL HRP Substrate B,混匀,给酶标板覆膜,37℃避光孵育15min,远离气流和其他温度波动。
5.6. 每孔加入50 μL Stop Solution,Stop Solution应按照与HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀,请轻轻敲击板以确保彻底混合。
6. 每孔加入50 μL Stop Solution,Stop Solution应按照与HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀,请轻轻敲击板以确保彻底混合。
6.7. 30 min内测定每孔450 nm处的吸光值(OD)。
7. 30 min内测定每孔450 nm处的吸光值(OD)。
7.1. 计算每个标准品和样品的复孔平均OD值并减去0浓度标准品(Std1)平均OD值。
2. 标准曲线的绘制:以标准溶液浓度为x轴,各标准品的平均OD值为y轴,绘制标准曲线。可以使用计算机软件来创建标准曲线。
1. 计算每个标准品和样品的复孔平均OD值并减去0浓度标准品(Std1)平均OD值。
1. 计算每个标准品和样品的复孔平均OD值并减去0浓度标准品(Std1)平均OD值。
1.2. 标准曲线的绘制:以标准溶液浓度为x轴,各标准品的平均OD值为y轴,绘制标准曲线。可以使用计算机软件来创建标准曲线。
2. 标准曲线的绘制:以标准溶液浓度为x轴,各标准品的平均OD值为y轴,绘制标准曲线。可以使用计算机软件来创建标准曲线。
2.典型标准曲线(R² ≥ 0.99)
Figure1. 96孔板分析的人LH标准曲线。数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线
A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量;
A: 稀释好的液体样本100 μL,细胞样本1-2×106个cells,组织样本1 g左右。
A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰,所以用酶标仪检测450nm处的OD值。
A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存,能保存一个月。
A: 无影响,只是计算的时候需注意,样本的OD值应代入计算式的X值中。
A: 血浆。
A: 可以满足,连续取的样本如果1周内检测,需保存于4℃;如1个月内检测,按一次使用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融;如6个月内检测,分装保存于-80℃,避免反复冻融。
A: 1. 加样本及试剂量不准,孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致; 2. 加样过快,孔间发生污染----加样不能过快; 3. 加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁; 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用; 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致; 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。
A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”,客户可以了解到相关指标。如有疑问,请联系support@abbkine.com进行详细咨询。
A: 为了避免基质效应,ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液,特别是血清稀释液的配方中,会含有一些动物蛋白成分(比如 BSA)和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下,会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中,我们研发人员开展的大量验证实验表明,稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。
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