人转化生长因子-β1 ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 人转化生长因子-β1 ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE6030
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Human TGF-β1 ELISA Kit

产品货号

KTE6030

产品特点：

检测灵敏度低至 8 pg/mL，可准确捕捉低丰度 TGF-β1 信号

高特异性抗体组合，对 TGF-β2、TGF-β3 等同家族蛋白无明显交叉反应

完整试剂配置，包含预包被板、标准品、检测抗体、HRP 体系及全套缓冲液，实验即开即用

兼容细胞培养上清、血清、血浆及其他生物液体，适配多种科研场景

标准品梯度经严格校准，确保 15.6–1000 pg/mL 范围内线性优异

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 人转化生长因子-β1 ELISA定量试剂盒（EliKine™ Human TGF-β1 ELISA Kit，货号 KTE6030）是一款基于双抗体夹心法的固相酶联免疫检测工具，可在细胞培养上清、血清、血浆及多种生物液体中对人源 TGF-β1 进行高灵敏、高特异性的定量分析。

背景与原理

转化生长因子-β1（TGF-β1）是一种 25 kDa 的非糖基化同型二聚体蛋白，由二硫键连接，其基因在进化上高度保守，人与小鼠同源性高达 99%。TGF-β1 在细胞增殖、分化、迁移及免疫调节中具有双重调控作用，既抑制细胞生长又促进组织修复，在伤口愈合、软骨/骨再生以及自身免疫病与移植排斥的免疫抑制治疗中扮演关键角色。本试剂盒采用经典夹心 ELISA 设计：预包被于微孔板上的抗人 TGF-β1 捕获抗体首先结合样本中的 TGF-β1；随后生物素化检测抗体与捕获的 TGF-β1 形成夹心复合物；再加入 Streptavidin-HRP 及 TMB 底物，通过 450 nm 吸光度值与标准曲线比对，实现 15.6 pg/mL–1000 pg/mL 范围内的精确定量。

应用领域

本试剂盒广泛应用于细胞功能研究、炎症与免疫调控机制探索、组织修复与再生医学、肿瘤微环境分析以及药物筛选与药效评价等方向，为体外细胞模型及临床前样本中 TGF-β1 的定量检测提供可靠工具。

产品参数

中文名称	人转化生长因子-β1 ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Human TGF-β1 ELISA Kit
产品货号	KTE6030
反应性	人
检测类型	ELISA
检测方法	夹心法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆#其它生物液体
试剂盒组分	• 人源 TGF-β1 抗体预包被微孔板 • 人源 TGF-β1蛋白标准品 • 人源 TGF-β1检测抗体 • EliKine™ Streptavidin-HRP • 标准品稀释液 • 实验缓冲液 • HRP底物 • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜.
检测范围	15.63 pg/ml-1000 pg/ml
灵敏度	8 pg/mL
基因ID	7040
蛋白质ID	P01137
蛋白序列链接	http://www.uniprot.org/uniprot/P01137
检测指标	TGF-β1
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm 处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm 处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

1× Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:5 的比例稀释 5× Sample Diluent 得到 1× Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Sample Diluent 用于稀释标准品、血清及血浆样品。

1× Sample Diluent：

1× Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:5 的比例稀释 5× Assay Buffer 得到 1× Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Assay buffer 用于稀释 Human TGF-β1 Detect Antibody (100×) 和 Streptavidin-HRP (100×)。

1× Assay Buffer：

Human TGF-β1 Standard：加入 1 mL 1× Sample Diluent 复溶 Human TGF-β1 Standard 得到 1,000 pg/mL 标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min 并轻轻晃动。

Human TGF-β1 Standard：

1× Human TGF-β1 Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay buffer 对 Human TGF-β1 Detect Antibody (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的 1× Human TGF-β1 Detect Antibody 应在稀释后 30 min 内使用。

1× Human TGF-β1 Detect Antibody：

1× Streptavidin-HRP：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay buffer 对 Streptavidin-HRP (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的 1× Streptavidin-HRP 应在 30 min 内使用。

1× Streptavidin-HRP：

HRP Substrate TMB：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate TMB：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1× Wash Buffer：使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1× Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30 天。

1× Wash Buffer：

标准曲线设置

按下表所示，用 1× Sample Diluent 将 1,000 pg/mL 标准品稀释为 1,000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、0 pg/mL Human TGF-β1 的标准品。

序号	标准品体积	1× Sample Diluent 体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	1,000 μL of 1,000 pg/mL	0	1,000
Std.2	500 μL of Std.1	500	500
Std.3	500 μL of Std.2	500	250
Std.4	500 μL of Std.3	500	125
Std.5	500 μL of Std.4	500	62.5
Std.6	500 μL of Std.5	500	31.25
Std.7	500 μL of Std.6	500	15.63
Std.8	0	500	0

序号标准品体积1× Sample Diluent 体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1× Sample Diluent 体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1× Sample Diluent 体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）Std.11,000 μL of 1,000 pg/mL01,000Std.2500 μL of Std.1500500Std.3500 μL of Std.2500250Std.4500 μL of Std.3500125Std.5500 μL of Std.450062.5Std.6500 μL of Std.550031.25Std.7500 μL of Std.650015.63Std.805000Std.11,000 μL of 1,000 pg/mL01,000Std.11,000 μL of 1,000 pg/mL01,000Std.2500 μL of Std.1500500Std.2500 μL of Std.1500500Std.3500 μL of Std.2500250Std.3500 μL of Std.2500250Std.4500 μL of Std.3500125Std.4500 μL of Std.3500125Std.5500 μL of Std.450062.5Std.5500 μL of Std.450062.5Std.6500 μL of Std.550031.25Std.6500 μL of Std.550031.25Std.7500 μL of Std.650015.63Std.7500 μL of Std.650015.63Std.805000Std.805000

注意：每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。
血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 20-30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。
血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：

血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 20-30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。

血清：

血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。

血浆：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h 内使用，则可以将其储存在 2-8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
TGF-β1 样品酸活化：生物样品中的 TGF-β1 通常以无活性的形式存在，在检测 TGF-β1 活性前样本必须用酸活化碱中和处理（标准品除外），培养液中的动物血清可能含有高水平的 TGF-β1 前体，因此需要通过对照来确定培养液中 TGF-β1 的背景浓度。
1. 细胞培养上清：每 100 μL 样品加入 20 μL 1N HCl; 室温孵育 10 min，然后用 20 μL 1N NaOH 中和。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数 1.4。
2. 血清或血浆：1:5 用 PBS 按稀释样本后参照上清处理方法。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数（5×1.4）。
每孔加入 100 μL 稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。
除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer 进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash buffer。
每孔加入 100 μL 1× Human TGF-β1 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。
重复步骤 4 中的洗涤。
每孔加入 100 μL 1× Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。
按照步骤 4 重复洗涤过程 5 次。
每孔加入 100 μL HRP Substrate TMB。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。
每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 30 min 内，测定每孔 450 nm 处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

TGF-β1 样品酸活化：生物样品中的 TGF-β1 通常以无活性的形式存在，在检测 TGF-β1 活性前样本必须用酸活化碱中和处理（标准品除外），培养液中的动物血清可能含有高水平的 TGF-β1 前体，因此需要通过对照来确定培养液中 TGF-β1 的背景浓度。

细胞培养上清：每 100 μL 样品加入 20 μL 1N HCl; 室温孵育 10 min，然后用 20 μL 1N NaOH 中和。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数 1.4。
血清或血浆：1:5 用 PBS 按稀释样本后参照上清处理方法。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数（5×1.4）。

TGF-β1 样品酸活化：

细胞培养上清：每 100 μL 样品加入 20 μL 1N HCl; 室温孵育 10 min，然后用 20 μL 1N NaOH 中和。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数 1.4。
血清或血浆：1:5 用 PBS 按稀释样本后参照上清处理方法。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数（5×1.4）。

细胞培养上清：每 100 μL 样品加入 20 μL 1N HCl; 室温孵育 10 min，然后用 20 μL 1N NaOH 中和。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数 1.4。

血清或血浆：1:5 用 PBS 按稀释样本后参照上清处理方法。计算样品最终浓度时，校正到稀释系数（5×1.4）。

每孔加入 100 μL 稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer 进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash buffer。

每孔加入 100 μL 1× Human TGF-β1 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。

重复步骤 4 中的洗涤。

每孔加入 100 μL 1× Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。

按照步骤 4 重复洗涤过程 5 次。

每孔加入 100 μL HRP Substrate TMB。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。

每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 30 min 内，测定每孔 450 nm 处的吸光值。

结果计算

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD 值。
标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD 值。

标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。

文献引用

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