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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 亚硝酸还原酶（NiR）活性检测试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro Nitrite Reductase (NiR) Activity Assay Kit) 是一套基于比色法的微量检测体系，可快速、便捷地测定植物组织、细菌或真菌样本中亚硝酸还原酶的活性，为细胞代谢研究提供可靠数据。
背景信息扩展
亚硝酸还原酶（NiR）是氮素循环中的关键限速酶，负责将亚硝酸盐（NO2−）还原为一氧化氮（NO），有效降低亚硝态氮在细胞及环境中的累积毒性。CheKine™ 亚硝酸还原酶（NiR）活性检测试剂盒（微量法）利用NiR催化NO2−还原导致重氮化反应底物减少的原理：反应体系中的NO2−与试剂发生重氮化-偶合反应生成紫红色化合物，在540 nm处具有特征吸收；NiR活性越高，NO2−消耗越多，540 nm吸光度下降越明显。通过测定吸光度变化即可定量反映样本中NiR的活性水平。
细胞代谢研究、植物逆境生理、微生物氮循环机制、环境微生物学、农业土壤改良及发酵工程等方向，尤其适合需要高通量、微量检测NiR活性的实验场景。
| 中文名称 | 亚硝酸还原酶(NiR)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Nitrite Reductase (NiR) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB4017 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent Ⅳ •Reagent Ⅴ •Standard |
| 分子 | NiR |
| 检测指标 | NiR |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Working Reagent：临用前根据用量将 Reagent IV 和 Reagent V 以 1：1的比例混合，现用现配。
Standard：10 µmol/mL亚硝酸钠标准溶液。4℃保存。
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（µmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 20 µL 10 µmol/mL Standard | 980 | 0.2 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (0.2 µmol/mL) | 500 | 0.1 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (0.1 µmol/mL) | 500 | 0.05 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (0.05 µmol/mL) | 500 | 0.025 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (0.025 µmol/mL) | 500 | 0.0125 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (0.0125 µmol/mL) | 500 | 0.00625 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (0.00625 µmol/mL) | 500 | 0.003125 |
| Std.8 | 0 | 500 | 0（空白管） |
称取约 0.1 g的新鲜组织，加入 1 mL Extraction Buffer捣碎，冰浴超声波提取（300 W，超声 5 s，间隔 8 s，总时间 5 min），10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液置于冰上待测。
收集 500万细菌或真菌细胞到离心管内，用冷 PBS清洗细菌或真菌细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细菌或真菌细胞 3 min（功率 300 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 3 min），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液置于冰上待测。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 540 nm。可见分光光度计用去离子水调零。
| 试剂 | 基质管（μL） | 对照管（μL） | 测定管（μL） | 标准管（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 20 | 20 | 0 |
| 去离子水 | 20 | 40 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 40 | 0 | 40 | 0 |
| ReagentⅡ | 40 | 40 | 40 | 0 |
| 混匀后，25℃孵育 1 h | - | - | - | - |
| Reagent III | 40 | 40 | 40 | 0 |
| 充分震荡 30 s，常温静置 5 min，取上清至微量玻璃比色皿或 96孔板中 | - | - | - | - |
| 上清液 | 70 | 70 | 70 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 0 | 70 |
| Working Reagent | 140 | 140 | 140 | 140 |
充分混匀，常温静置 5 min，测定 540 nm各管吸光值，分别记为 A 基质、A 对照、A 测定、A 标准和 A 空白，计算ΔA 测定=A 基质-(A 测定-A 对照)，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将ΔA 测定带入方程得到 x (μmol/mL)。
单位定义：每mg组织蛋白每小时还原 1 μmol NO2-的量为一个酶活力单位。
单位定义：每 g组织每小时还原 1 μmol NO2-的量为一个酶活力单位。
单位定义：每 104个细菌或真菌细胞每小时还原 1 μmol NO2-的量为一个酶活力单位。
V 反总：取上清液前的反应体系体积，0.14 mL；V 样：加入的样本体积，0.02 mL；V 样总：加入的 Extraction Buffer体积，1.0 mL；T：反应时间，1 h；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细菌或真菌细胞数量，104。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
货号：KTD104
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