蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

• 酶标仪或可见光分光光度计（能测 480 nm处的吸光度）
• 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
• 恒温水浴锅、制冰机、离心机
• 去离子水
• 匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

ReagentⅠ(Standard)：即用型；使用前，平衡到室温。-20℃保存。

ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Reagent IV：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Reagent V：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。

称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。该试剂盒提取的样本也可以适用于 KTB3130、KTB3140、KTB3150的测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min，调节波长到 480 nm。可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中进行）：

注意：标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 1.0，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

（1）按样本蛋白浓度计算：

酶活定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生 1 µg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-II 活性 (U/mg prot)=(C 标准×V 样×ΔA 测定÷ΔA 标准)÷(V 样×Cpr)÷T=100×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr

（2）按样本质量计算:

酶活定义：每 g样品每分钟催化产生 1 µg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-II 活性 (U/g 鲜重)=(C 标准×V 样×ΔA 测定÷ΔA 标准)÷(V 样×W÷V 样总)÷T=100×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

C 标准：标准管浓度，1,000 µg/mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.01 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间，10 min。

注意事项

1. 尽量在 30 min内完成测定。