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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 淀粉脱分支酶（SBE）试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro Starch Debranching Enzyme Activity Assay Kit) 是一款专为细胞代谢研究设计的微量级检测工具，可快速、便捷地测定动植物组织样本中淀粉脱分支酶（SBE）的活性，为解析细胞碳源利用与能量代谢提供关键数据。
背景原理
淀粉脱分支酶（SBE）专一性裂解支链淀粉的α-1,6-糖苷键，释放线性葡萄糖链，从而调控支链淀粉链长与分支密度，在细胞碳代谢与淀粉重塑中扮演重要角色。CheKine™ 淀粉脱分支酶（SBE）试剂盒（微量法）基于3,5-二硝基水杨酸法，通过检测SBE催化支链淀粉产生的还原糖量，间接计算酶活性。还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕红色产物，在540 nm处具有特征吸收，其吸光度变化与酶活性呈正相关。
应用领域
适用于细胞代谢研究中对淀粉脱分支酶活性的定量分析，可服务于植物生理、作物品质改良、微生物发酵及动物能量代谢等多学科实验需求。
| 中文名称 | 淀粉脱分支酶(SBE)试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Starch Debranching Enzyme (SBE) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB3034 |
| 样本类型 | 动植物组织 |
| 试剂盒组分 | • Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent IV •Standard |
| 分子 | 淀粉脱分支酶（SBE） |
| 检测指标 | 淀粉脱分支酶（SBE） |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Working Reagent II：临用前配制；48 T试剂盒向 Reagent II 中加入 10 mL去离子水；96 T试剂盒向 Reagent II 中加入 20 mL去离子水，充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存 2周。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Reagent Ⅳ：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
注意：Reagent Ⅳ有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。
Standard：临用前配制；加入 1 mL去离子水，充分溶解，即 10 mg/mL葡萄糖标准品；用不完的试剂 4℃保存 2周。
1 mg/mL葡萄糖标准品：取 200 µL 10 mg/mL葡萄糖标准品加 1,800 µL 去离子水配制成 1 mg/mL葡萄糖标准品；使用 1 mg/mL葡萄糖标准品，按照下表所示，进一步稀释标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（mg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 400 μL of 1 mg/mL Standard | 100 | 0.8 |
| Std.2 | 300 μL of 1 mg/mL Standard | 200 | 0.6 |
| Std.3 | 250 μL of 1 mg/mL Standard | 250 | 0.5 |
| Std.4 | 200 μL of 1 mg/mL Standard | 300 | 0.4 |
| Std.5 | 150 μL of 1 mg/mL Standard | 350 | 0.3 |
| Std.6 | 100 μL of 1 mg/mL Standard | 400 | 0.2 |
| Std.7 | 50 μL of 1 mg/mL Standard | 450 | 0.1 |
| Std.8 | 25 μL of 1 mg/mL Standard | 475 | 0.05 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。
称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction Buffer，进行冰浴匀浆。然后 15,000 g，4℃离心 10 min，取上清，置于冰上待测。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 根据实验用量，吸取部分样本上清置于 95℃水浴 5 min灭活（盖紧，以防止水分散失），室温冷却后 8,000 g，4℃离心 5 min，取上清待测。
3. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：
| 试剂 | 测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） | 空白管（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本上清 | 100 | 0 | 0 | 0 |
| 灭活样本 | 0 | 100 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 0 | 100 | 0 | 0 |
| Working Reagent II | 100 | 0 | 0 | 0 |
| 混匀，37℃水浴 2 h | ||||
| Reagent III | 100 | 100 | 0 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 300 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 0 | 0 | 300 |
| Reagent Ⅳ | 300 | 300 | 300 | 300 |
4. 混匀，95℃水浴 5 min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却至室温，8,000 g，4℃离心 5 min，取 200 μL上清至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 540 nm处吸光值。测定管记为 A 测定，对照管记为 A 对照，标准管记为 A 标准，空白管记为 A 空白。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.05 mg/mL的ΔA 标准可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 0.8 mg/mL的ΔA 标准，上清液可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定代入方程得到 x (mg/mL)。
2. SBE活性的计算：
酶活单位定义：每 g组织每小时催化产生 1 mg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
SBE (U/g 鲜重)=1.5×x÷W×F
V 反总：反应体系总体积，0.3 mL；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；T：反应时间，2 h；W：样本质量，g；F：稀释倍数。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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