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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 漆酶活性检测试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro Laccase Activity Assay Kit) 是一种基于 ABTS 显色反应的微孔板检测体系，可在 420 nm 处通过比色法快速、微量地测定植物组织与真菌样本中漆酶（Laccase）的催化活性。
漆酶（Laccase） 是一种含铜的多酚氧化酶，隶属铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌及高等植物细胞中。其催化中心的多铜簇可介导底物单电子氧化，因而在纸浆生物漂白、环境污染物降解、木质纤维素分解及生物传感器构建等领域具有重要研究价值。本试剂盒利用漆酶催化底物 ABTS 生成蓝绿色的 ABTS•+ 自由基，该产物在 420 nm 处具有显著吸收峰，且摩尔吸光系数远高于底物本身。通过连续监测 420 nm 处吸光度的上升速率，即可定量计算样本中的漆酶活性。
植物逆境生理研究、真菌代谢途径解析、木质纤维素资源转化、环境微生物修复及生物催化工艺开发等细胞代谢相关实验。
| 中文名称 | 漆酶活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Laccase Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB3029 |
| 样本类型 | 植物组织、真菌 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Reagent I •Reagent Ⅱ |
| 分子 | 漆酶 |
| 检测指标 | 漆酶 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Working Reagent II：临用前配制；每瓶加入 15 mL ReagentⅠ，充分溶解。用不完的试剂 4℃避光保存 1周。配好的Working Reagent II 应为无色透明，若试剂变色则不能使用。
1. 植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心 30 min，取上清液，置冰上待测。
2. 真菌：收集 500万真菌到离心管内，用冷 PBS清洗真菌，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎真菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 12,000 g，4℃离心 30 min，取上清液，置冰上待测。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 420 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿操作）：
| 试剂 | 测定孔（μL） | 空白孔（μL） |
|---|---|---|
| 样本 | 30 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 30 |
| Working Reagent II | 170 | 170 |
3. 混匀，立即记录 420 nm处 10 s时吸光值 A1，45℃准确孵育 3 min，记录 420 nm处 190 s时吸光值 A2，空白孔记为 A 空白，测定孔记为 A 测定，计算ΔA 空白=A2 空白-A1 空白，ΔA 测定=A2 测定-A1 测定，ΔA=ΔA 测定-ΔA 空白。
（1）按蛋白浓度计算
酶活单位定义：每 mg蛋白每分钟氧化 1 nmol ABTS 自由基所需的酶量定义为一个酶活力单位。
（2）按样本鲜重计算：
酶活单位定义：每 g组织每分钟氧化 1 nmol ABTS自由基所需的酶量定义为一个酶活力单位。
（3）按真菌数量计算：
酶活单位定义：每 104个真菌每分钟氧化 1 nmol ABTS自由基所需的酶量定义为一个酶活力单位。
ε：ABTS 自由基摩尔消光系数：3.6×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5 cm；V 反总：反应总体积，0.2 mL=2×10-4 L；V 样：加入反应体系中样本体积，0.03 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：真菌数量，以万计。T：反应时间，3 min；109：单位换算系数，1 mol=109 nmol。
将上述计算公式中光径 d: 0.5 cm调整为 d: 1 cm进行计算即可。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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