活性氧(ROS)含量检测试剂盒(荧光酶标仪法)-CheKine™

*请在实验前检查各组分的量。

*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。

自备仪器与试剂

检测量较大时合理使用多通道移液器有助于提高实验效率

注意事项

• 正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
• 对于组织样本及细胞样本等，可通过测定蛋白浓度来进行样本间结果均一化。推荐使用亚科因货号：KTD3001 的蛋白质定量试剂盒（BCA法）。
• 生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护，穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。
• 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

实验流程

试剂准备

样本制备

注意：本试剂盒也可用于检测冻存的组织样本，推荐使用新鲜样本效果更佳。

• 动植物组织：称取 0.1 g组织加入 1 mL Reagent Ⅰ将样本进行冰浴匀浆。4℃，8000 g离心 10 min，取上清置于冰上待测。
• 细胞样本：收集 5×10⁶个细胞，用预冷的 PBS 清洗 1次，800 g离心 2 min，弃上清。加入 1 mL Reagent Ⅰ进行冰浴超声破碎。超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s）。4℃，8000 g离心 10 min后，取上清置于冰上待测。

实验步骤

1. 酶标仪准备：预热 30 min以上，调节荧光激发波长 488 nm，发射波长 525 nm。
2. 检测体系配制：在 96孔全黑或全白板中按照如下方式操作

3. 吸光度检测：充分混匀，37℃避光孵育 20 min。于激发波长 488 nm，发射波长 525 nm 处检测荧光强度，分别标记为 RFU 测定和 RFU 空白。

结果计算

自动计算

为帮助您更轻松、准确地完成相关计算，我们特在官网提供了"在线计算器小工具"。您无需手动计算，只需在网页上输入数值，即可快速获得可靠结果。访问方式：官网[https://www.abbkine.cn] > 进入"技术中心"> 查找"在线计算器"工具。

手动计算

以下为您提供的推导过程计算公式和简洁计算公式，两者完全相等。

1. 数据处理

计算ΔRFU=RFU 测定-RFU 空白。

2. 样本 ROS计算

• 按样本质量计算

ROS (RFU/g)=ΔRFU÷(V 样÷V 提×W)×n=5.13×ΔRFU÷W×n

• 按细胞数量计算:

ROS (RFU/10⁴)=ΔRFU÷(V 样÷V 提×500)×n=0.0103×ΔRFU×n

• 按蛋白浓度计算

ROS (RFU/ mg prot)=ΔRFU÷(V 样×Cpr)×n=5.13×ΔRFU÷Cpr×n

V 样：加入样本，0.195 mL；V 提：样本提取体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞总数，5×10⁶，以 10⁴为单位；n：样品稀释倍数。