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活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的Caspase-1 活性分析试剂盒（比色法） (Caspase-1 Assay Kit, Colorimetric) 是一种基于比色法的快速检测工具，通过测定底物 Ac-YVAD-pNA 被 Caspase-1 剪切后释放的 pNA 在 405 nm 处的吸光度变化，实现对细胞裂解液中 Caspase-1 活性的定量分析。
Caspase 全称为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 (cysteinyl aspartate specific proteinase)，是一类在细胞凋亡与炎症反应中发挥关键作用的蛋白酶家族。在人类中已鉴定出 11 种不同的 Caspase，依据序列同源性可分为三大亚族：Caspase-1 亚族（Caspase-1、4、5、11）、Caspase-2 亚族（Caspase-2、9）以及 Caspase-3 亚族（Caspase-3、6、7、8、10）。其中，Caspase-1 作为炎症小体通路的核心执行分子，可剪切并激活 IL-1β 与 IL-18 等促炎细胞因子，其活性升高通常标志着细胞处于早期或中期凋亡/周期阻滞状态。本试剂盒利用 Caspase-1 对特异性底物 Ac-YVAD-pNA 的识别与剪切作用，使底物释放出黄色的对硝基苯胺 (pNA)，通过 405 nm 吸光度变化即可灵敏反映 Caspase-1 的活性水平。
本试剂盒适用于细胞状态研究，可广泛应用于炎症小体活化、细胞焦亡 (pyroptosis) 机制探索、药物毒性评价及免疫调节剂筛选等方向，为细胞凋亡/周期分析提供核心检测手段。
| 中文名称 | Caspase-1 活性分析试剂盒(比色法) |
| 英文名称 | Caspase-1 Assay Kit (Colorimetric) |
| 产品货号 | KTA3020 |
| 检测类型 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Cell 裂解缓冲液 • 反应缓冲液 (2×) • Ac-YVAD-pNA (4mM) • pNA(10mM) • DTT (100×) |
| 保存建议 | 请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为12个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
| 组分 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| Cell Lysis Buffer | 5 mL (20 T) 10 mL (50 T) 20 mL (100 T) | 4℃ |
| Reaction Buffer (2×) | 10 mL (20 T) 20 mL (50 T) 40 mL (100 T) | 4℃ |
| Ac-YVAD-pNA (4 mM) | 100 µL (20 T) 250 µL (50 T) 500 µL (100 T) | -20℃, 避光保存 |
| pNA (10 mM) | 100 µL (20 T) 250 µL (50 T) 500 µL (100 T) | -20℃, 避光保存 |
| DTT (100×) | 150 µL (20 T) 400 µL (50 T) 750 µL (100 T) | -20℃ |
Working Cell Lysis Buffer: 使用前，立即加入 DTT（最终浓度：每 1 mL Cell Lysis Buffer加 10 µL DTT（100×）），置于冰上；4℃保存。
Working Reaction Buffer (1×): 使用前，用去离子水稀释到 Reaction Buffer (1×)，再加入 DTT（最终浓度：每 1 mL Reaction Buffer (1×)加 10 µL DTT（100×）），置于冰上；4℃保存。
Ac-YVAD-pNA (4 mM): 即用型；使用前，置于冰上；–20℃保存。用不完的试剂-20℃避光分装保存，避免反复冻融。
pNA (10 mM): 即用型；使用前，置于冰上；–20℃避光保存。用不完的试剂-20℃避光分装保存，避免反复冻融。
DTT (100×): 即用型；使用前，置于冰上；–20℃保存。用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。
按下表所示，用 Reaction Buffer (1×，含 DTT)将标准品 pNA (10 mM) 稀释为 200、100、50、25、12.5、0 µM 的标准溶液。
| 序号 | 标准品体积 | Reaction Buffer (1×，含 DTT) (µL) | 标准品浓度（μM） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 6 µL pNA (10 mM) | 294 | 200 |
| Std.2 | 150 µL of Std.1 (200 μmol/mL) | 150 | 100 |
| Std.3 | 150 µL of Std.2 (100 μmol/mL) | 150 | 50 |
| Std.4 | 150 µL of Std.3 (50 μmol/mL) | 150 | 25 |
| Std.5 | 150 µL of Std.4 (25 μmol/mL) | 150 | 12.5 |
| Std.6 | 0 | 150 | 0 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：我们建议使用新鲜样品。或按照"样本制备"将样品保存在-80℃。使用前，在冰上解冻，这可能会影响样品的稳定性，并且读数可能会低于预期。此试剂盒可检测蛋白水解活性。在样品制备步骤中请勿使用蛋白酶抑制剂，它可能会干扰测定。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3002的蛋白质定量试剂盒（Bradford法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪预热 30 min以上，调节波长到 405 nm。
2. 操作表（下述操作在 96孔板中操作）：
| 空白孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） | |
|---|---|---|---|---|
| Working Reaction Buffer (1×，含 DTT) | 100 | 50 | 55 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 0 | 100 |
| 上清 | 0 | 50 | 50 | 0 |
| Ac-YVAD-pNA (4 mM) | 5 | 5 | 0 | 0 |
混匀，37℃孵育 1-2 h，检测 405 nm处吸光值。空白孔记为 A 空，测定孔记为 A 测，对照孔记为 A 对。计算ΔA 测=A 测-A 空。仅组织样本需要设置对照孔，对于组织样本，ΔA 测=A 测-A 对。
立即检测 405 nm处吸光值，计算ΔA 标=A 标-AStd.6，AStd.6为不含pNA的标准孔的吸光值。
注意：1.空白孔和标准孔只需测定 1-2 次。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验；2.对于组织样本，样本本身有颜色，需要设置对照孔，细胞样本一般不需要设置对照孔；3.在反应体系中，适当混匀，注意避免在混匀时产生气泡；4.发现颜色变化比较明显时即可测定 405 nm的波长。如果颜色变化不明显，可以适当延长孵育时间至 4 h。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 按标准曲线计算
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标为 y轴，绘制标准曲线 y=kx+b。将样本的ΔA 测带入方程得到 x值（μM）。
2. 按酶活性增加百分比计算
Caspase 1活性增加百分比=(实验处理组 A 测定-A 空白)/(实验对照组 A 测定-A 空白)×100%
该方法简单可靠，可粗略反应酶活性情况。
3. 按酶活计算
参考 Chemicon公司的 Caspase酶活力单位的定义：One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric pNA-substrate per hour at 37℃ under saturated substrate concentrations。即一个酶活力单位定义为当底物饱和时,在 37℃一个小时内可以剪切 1 nmol pNA底物产生 1 nmol游离 pNA的酶量。这样就可以计算出样品中含有多少个酶活力单位的 caspase 酶活性。
Caspase 1活性（U/mg prot）=x×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×103=2.1×x÷Cpr÷T
V 反总：反应体系总体积，0.105 mL=1.05×10-4L；
V 样：加入的样本体积，0.05 mL；
T：反应时间，h；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
103：单位换算系数，1 μmol =103 nmol。
注意：对于样品中 Caspase 1酶活力特别高的情况，须用Working Cell Lysis Buffer适当稀释样品后再进行测定。计算时再乘以稀释的稀释倍数 n。
A: 可以，细胞培养上清中包含细胞分泌的可溶性蛋白。可按照液体样本的前处理方法对细胞培养上清进行处理：取适量样本于离心管中，2000g速度离心5分钟，取上清液进行检测。
杂志名称: Aging Cell | 作者: Zhu, Tian‐Yi, et al.
IF: 8 | 发表时间: 2024
杂志名称: Frontiers in Pharmacology | 作者: Niu, Yaoyun, et al.
IF: 4 | 发表时间: 2024
杂志名称: Food Science & Nutrition | 作者: Luo, Ruixi, et al.
IF: 4 | 发表时间: 2024
杂志名称: Cancers | 作者: Teng, **-Feng, et al.
IF: 4 | 发表时间: 2024
杂志名称: Archives of physiology and biochemistry | 作者: Zhang, Yonghong, et al.
IF: 2 | 发表时间: 2024
杂志名称: Journal of Medicinal Food | 作者: Luo, Ruixi, et al.
IF: 2 | 发表时间: 2024
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