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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 锰过氧化物酶（Mnp）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法设计的微量规格试剂盒，可在 96 孔板中快速、稳定地测定动植物组织、血清（浆）或其他液体样本中的锰过氧化物酶活性，为细胞代谢研究提供可靠数据。
锰过氧化物酶（MnP, EC 1.11.1.13）是一类含亚铁血红素的过氧化物酶，主要分布于担子菌等微生物中，属于木质素降解酶系。该酶在 Mn²⁺ 存在条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，产物在 465 nm 处具有特征吸收峰。通过监测 465 nm 吸光度的变化，即可定量反映样本中 MnP 的活性水平。该反应体系已被广泛用于木质素降解、环境污染物（如氯化物、叠氮化合物、DTT、多环芳烃等）去除机制的研究。
本试剂盒适用于细胞代谢研究，可广泛应用于真菌木质素降解机制探索、环境微生物修复评估、以及植物–微生物互作中 MnP 活性变化的监测。
| 中文名称 | 锰过氧化物酶(Mnp)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Manganese Peroxidase (Mnp) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1151 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Il •Reagent Ⅲ •Standard |
| 检测范围 | •测定动植物组织、血清（浆）或其他液体样本内的锰过氧化物酶（Mnp）活性。 • 提供了详细的样品制备和结果计算方法。 |
| 分子 | 锰过氧化物酶 |
| 检测指标 | 锰过氧化物酶（MnP,EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。MnP在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
按照样本质量（g）：Extraction Buffer体积（mL）为 1:5-10的比例（建议称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction Buffer）加入 Extraction Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：Extraction Buffer体积（mL）为 500-1000:1的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1 mL Extraction Buffer）加入 Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细菌或细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
直接检测。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 465 nm。可见分光光度计用去离子水调零。
2. 测定前根据实验用量取出部分 Extraction Buffer, Reagent I, Reagent II 和 Reagent III 置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他动物）预热 10 min以上。
| 试剂 | 测定孔（μL） |
|---|---|
| 样本上清 | 20 |
| Extraction Buffer | 100 |
| Reagent I | 20 |
| Reagent II | 40 |
| Reagent III | 20 |
混匀，于 465 nm处测定 30 s时的吸光值 A1和 2 min 30 s后的吸光值 A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验，若一次性测定样本过多，可根据使用量将 Extraction Buffer, Reagent I, Reagent II 和 Reagent III 按 5:1:2:1的比例配成工作液后进行预热，测定时按照 20 μL样本+180 μL工作液加入微量玻璃比色皿或 96孔板中进行测定。当ΔA大于 0.6时，建议将样本用 Extraction Buffer稀释后测定；当ΔA小于 0.002时，可以适当加大样本量后重新进行测定。注意同步修改计算公式。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每 min氧化 1 nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP (U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样)÷T=826×ΔA÷Cpr
单位的定义：每 g组织在反应体系中每min氧化 1 nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP (U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=826×ΔA÷W
单位的定义：每 104细菌或细胞在反应体系中每 min氧化 1 nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP (U/g 104)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.652×ΔA
单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每 min氧化 1 nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP (U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=826×ΔA
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12,100 L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；V样：加入反应体系中样本体积，0.02 mL；V样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2 min; 500：细菌或细胞总数，5×106。
将上述计算公式中光径 d: 0.5 cm调整为 d: 1 cm进行计算即可。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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