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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 钙含量检测试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro Calcium Content Assay Kit) 是一款基于邻甲酚酞络合酮-比色法的细胞代谢检测工具，可在 96 孔微量体系内快速、稳定地定量细胞裂解液、培养上清、动植物组织匀浆及血清/血浆等样本中的总钙含量。
钙（calcium）是哺乳动物体内含量最丰富的矿物质，以游离 Ca²⁺ 或结合态（如磷酸钙、碳酸钙）两种形式存在，广泛参与肌肉收缩、细胞粘附、激素/神经递质释放、糖原代谢、细胞增殖与分化、血凝、神经突触传递及骨骼支持等生理过程。细胞内外钙稳态失衡与多种疾病密切相关，因此准确测定样本中的钙含量对细胞代谢研究具有重要意义。
CheKine™ 钙含量检测试剂盒（微量法）利用邻甲酚酞络合酮在碱性条件下与 Ca²⁺ 形成紫色络合物，该络合物在 575 nm 处具有特征吸收峰，其吸光度与钙离子浓度呈正比，通过微量比色即可实现高通量、高灵敏度的定量检测。
本试剂盒适用于细胞代谢研究、信号转导机制探索、药物对钙稳态影响评价及动植物营养与发育研究等场景，特别适合在细胞水平高通量筛选钙相关调控因子或药物。
| 中文名称 | 钙含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Calcium Content Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1117 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Standard |
| 分子 | 钙 |
| 检测指标 | 钙 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Working Reagent II：临用前配制；48 T加入 15 mL Reagent I，96 T加入 30 mL Reagent I，充分溶解，现配现用。
Working Reagent III：临用前配制；48 T加入 14 mLWorking Reagent II，96 T加入 28 mLWorking Reagent II，充分溶解待用。4℃避光保存可稳定 1周。
Standard：20 μmol/mL钙标准液，即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
20 μmol/mL钙标准液，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | Concentration (μmol/mL) |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 50 µL 20 μmol/mL Standard | 450 | 2 |
| Std.2 | 200 µL of Std.1 (2 μmol/mL) | 200 | 1 |
| Std.3 | 200 µL of Std.2 (1 μmol/mL) | 200 | 0.5 |
| Std.4 | 200 µL of Std.3 (0.5 μmol/mL) | 200 | 0.25 |
| Std.5 | 200 µL of Std.4 (0.25 μmol/mL) | 200 | 0.125 |
| Std.6 | 200 µL of Std.5 (0.125 μmol/mL) | 200 | 0.063 |
| Std.7 | 200 µL of Std.6 (0.063 μmol/mL) | 200 | 0.031 |
| Std.8 | 0 | 200 | 0（空白孔） |
1. 动植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL去离子水，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 细胞：收集 1,000万细胞到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL去离子水，冰浴超声波破碎细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 12,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
3. 血清（浆）等液体样本：直接检测。
注意：1. 制备血清时建议使用肝素，避免使用 EDTA类的螯合剂，因为螯合剂会和钙离子结合而影响检测结果；
2. 如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min，调节波长到 575 nm。可见光分光光度计用去离子水调零。
| 试剂 | 测定孔（μL） | 标准孔（μL） |
|---|---|---|
| 样本 | 4 | 0 |
| Standard | 0 | 4 |
| Working Reagent III | 196 | 196 |
充分混匀，静置 5 min后于 96孔板或微量玻璃比色皿中测定 575 nm处测定各孔吸光值，分别记为 A 测定、A 空白和 A 标准，计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (μmol/mL)。
2. 钙含量的计算
（1）按样本鲜重计算
钙离子 (μmol/g 鲜重)=x÷W×F
（2）按蛋白浓度计算
钙离子 (μmol/mg prot)=x÷Cpr×F
（3）按样本体积计算
钙离子 (μmol/mL)=x×F
（4）按细胞数量计算
钙离子 (μmol/104)=x÷N×F
W：样本质量，g；F：样本稀释倍数；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；N：细胞总数，104。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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