过氧化氢酶(CAT)活性分析试剂盒(钼酸铵比色法)-CheKine™

*请在实验前检查各组分的量。

*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。

自备仪器与试剂

注意事项

• 正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
• 对于组织样本及细胞样本等，可通过测定蛋白浓度来进行样本间结果均一化。推荐使用亚科因货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA 法）。
• 本试剂盒兼容分光光度计检测，请按照分光光度计检测要求按比例调节检测试剂配制量。如有疑问，可咨询本司技术人员（400-6800-830）。
• 建议实验者自行建立标准曲线以提高结果准确度。如未自行建立标准曲线，可参考结果展示部分的典型标准曲线公式进行结果计算。
• 生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护，穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。
• 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

实验流程

试剂准备

试剂准备

标准品配制

取 0.5 mL Reagent Ⅰ作为标准品储备液，加入反应体系后的终浓度为 13.2 µmol/mL。使用去离子水进一步将储备液稀释至终浓度为 6.6 µmol/mL、3.3 µmol/mL、1.65 µmol/mL、0.825 µmol/mL、0.413 µmol/mL、0.206 µmol/mL的标准品工作液，以去离子水作为空白孔。每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。

样本制备

• 动植物组织：称取约 0.1 g动植物组织样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，8000 g，4℃离心 10 min，取上清液于新离心管中，置冰上待检测。
• 细胞或细菌：收集 5×106个细胞或细菌，用冷的 PBS 清洗细胞或细菌，800 g离心 2 min后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎 5 min（功率 30%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 8000 g，4℃离心 10 min，取上清液于新离心管中，置冰上待测。
• 血清（浆）：直接检测。

实验步骤

1. 酶标仪准备：预热 30 min以上，调节波长到 405 nm。
2. 检测体系配制：在 1.5 mL EP 管中按照如下方式操作，标准曲线和空白孔一般只做 1次，每个测定孔均需设置一个对照孔。

3. 吸光度检测：混匀后取 200 μL于 96 孔板，立即在 405 nm处读取吸光度值，分别记为 A 空白、A 标准、A 对照和 A 测定。

结果计算

自动计算

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手动计算

以下为您提供的推导过程计算公式和简洁计算公式，两者完全相等。

1. 数据处理

计算ΔA 标准=A 标准-A 空白, ΔA 测定=A 对照-A 测定。

2. 标准曲线绘制

以标准品浓度为 y轴，ΔA 标准为 x轴，绘制标准曲线。将ΔA 测定代入方程得到 y值（µmol/mL）。

3. 样本 CAT活性计算

按样本质量计算：

酶活单位的定义：每克组织每分钟催化 1 μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

按细菌或细胞数量计算：

酶活单位的定义：每 104个细菌或细胞每分钟催化 1 μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

按血清（浆）体积计算：

酶活单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1 μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

按蛋白浓度计算：

酶活单位的定义：每毫克蛋白每分钟催化 1 μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

V 反总：反应体系总体积，0.445 mL；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；T：反应时间，10 min；W：样本质量，g；n：样本稀释倍数；500：细胞或细菌数量，以 104为单位；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。