ATP含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

自备耗材

• 酶标仪或可见分光光度计（能测 700 nm处的吸光度）
• 96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头
• 离心机，水浴锅
• 去离子水
• 匀浆器（如果是组织样本）

试剂盒组分

试剂准备

Reagent I：临用前 48 T加入 1.2 mL去离子水，96 T加入 2.4 mL去离子水，加热煮沸至完全溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存 4周，禁止反复冻融。

Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Working Reagent III：临用前 48 T加入 0.6 mL去离子水，96 T加入 1.2 mL去离子水溶解待用。用不完的试剂分装后-20℃避光保存 4周，禁止反复冻融。

Reagent IV：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

Reagent V：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Working Reagent：临用前配制，按 Reagent IV：Reagent V=1:5的比例配制，用多少配多少，现用现配。

Standard：临用前加入 10 mL去离子水溶解，浓度为 2 μmol/mLATP标准液。用不完的试剂分装后-20℃避光保存 4周，避免反复冻融。

样本制备

1. 植物或动物组织样本：称取约 0.1 g组织，加入 1 mL去离子水，冰浴匀浆，100℃加热提取 5 min，8,000 g，4℃离心 15 min，取上清液待测。
2. 细胞或细菌：收集 500万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL去离子水，冰浴超声波破碎细胞或细菌 1 min（功率 20%或 200 W，超声 2 s，间隔 1 s，重复 20次），100℃加热提取 5 min，8,000 g，4℃离心 15 min，取上清液待测。
3. 血清（浆）样本：取 0.1 mL血清（浆），加 1 mL去离子水，充分混匀；100℃加热提取 5 min，8,000 g，4℃离心 15 min，取上清液待测。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 700 nm，可见分光光度计用去离子水调零。

操作表：

充分混匀，37℃孵育 30 min

Working Reagent 200 200 200 200

37℃孵育 20 min 后，700 nm波长处测定吸光值。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

结果计算

1. ATP含量计算：

(1) 按血清（浆）体积计算

(2) 按样本鲜重计算

(3) 按蛋白浓度计算

(4) 按细菌或细胞密度计算

CStandard：标准品的浓度，2 μmol/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01 mL；V2：加入去离子水的体积，1 mL；V3：加入血清（浆）体积：0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；5：细胞或细菌总数，5×106。