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肌酸含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
CheKine™ Micro Creatine Content Assay Kit
产品特点:
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活动截止时间:2024年1月31日
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CheKine™ 肌酸含量检测试剂盒(微量法)(CheKine™ Micro Creatine Content Assay Kit) 是一种基于比色法的微量检测体系,可在 20-600 μg/mL 线性区间内,快速、准确地定量动物组织及血清(浆)样本中的肌酸含量。
肌酸(Creatine)是脊椎动物体内一种关键的含氮有机酸,主要以磷酸肌酸形式存在于肌肉与脑组织中,通过 ADP→ATP 的快速再合成维持细胞能量稳态。动物体内肌酸水平受饮食摄入、运动量、品种、年龄及健康状态等多因素影响。本试剂盒利用肌酸在碱性条件下与联乙酰-α-萘酚发生特异性显色反应,生成红色产物,于 520 nm 处呈现稳定吸收峰;吸光度与样本中肌酸浓度成正比,从而实现对微量样本的高灵敏定量。
本试剂盒适用于细胞代谢研究、动物组织能量代谢评估及血清(浆)肌酸水平监测,可广泛应用于运动生理学、营养干预、药物筛选及代谢疾病模型等科研场景。
| 中文名称 | 肌酸含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Creatine Content Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1003 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 动物组织、血清(浆) |
| 试剂盒组分 | •ReagentⅠ •ReagentⅡ •ReagentⅢ •ReagentⅣ •ReagentⅤ •Standard |
| 检测范围 | 20-600μg/mL |
| 灵敏度 | 20 μg/mL |
| 分子 | 肌酸 |
| 检测指标 | 肌酸 |
| 注意事项 | •建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在 4 h内完成样品解冻。 |
| 保存建议 | 建议收到货后避光保存于-20°C,有效期为6个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输(蓝冰) |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 |
ReagentⅠ:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。
Working ReagentⅡ:临用前配制;48 T加入 25 mL去离子水,96 T加入 50 mL去离子水 60℃水浴加热溶解后用滤纸过滤;未用完的试剂 4℃避光可保存三天,若有晶体析出可 60℃水浴加热溶解。
Working ReagentⅢ:临用前配制;取 20 μL ReagentⅢ加入 20 mL去离子水,充分混匀,现用现配;用不完的 ReagentⅢ4℃避光保存。
ReagentⅣ: 即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。
Working ReagentⅤ:临用前配制;向一瓶 ReagentⅤ中加入 20 mL ReagentⅣ充分溶解后,加入 2 mL Working ReagentⅢ充分混匀,配好后当天使用。
Standard:临用前配制;加入 1 mL去离子水,充分溶解得 10 mg/mL肌酸标准液,用不完的试剂 4℃保存 1个月。使用 10 mg/mL Standard,按照下表所示,进一步稀释标准品:
| 序号 | Standard体积(μL) | 去离子水体积(μL) | 浓度(μg/mL) |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 48 μL 10 mg/mL Standard | 952 | 480 |
| Std.2 | 40 μL 10 mg/mL Standard | 960 | 400 |
| Std.3 | 32 μL 10 mg/mL Standard | 968 | 320 |
| Std.4 | 24 μL 10 mg/mL Standard | 976 | 240 |
| Std.5 | 16 μL 10 mg/mL Standard | 984 | 160 |
| Std.6 | 8 μL 10 mg/mL Standard | 992 | 80 |
| Std.7 | 4 μL 10 mg/mL Standard | 996 | 40 |
| Blank | 0 | 1,000 | 0 |
1. 动物组织:称取约 0.1 g样本,加入 1 mL去离子水,冰浴匀浆,10,000 g,4℃离心 10 min,取上清液,置冰上待测。
2. 血清(浆):直接检测。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上,调节波长到 520 nm,可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 水浴锅调至 30℃。
3. 操作表(下述操作在 1.5 mL离心管中操作):
| 试剂 | 测定管(μL) | 标准管(μL) |
|---|---|---|
| 去离子水 | 100 | 100 |
| ReagentⅠ | 100 | 100 |
| 样本 | 100 | 0 |
| Standard | 0 | 100 |
| Working ReagentⅡ | 100 | 100 |
| 混匀,10,000 g,4℃离心 10 min,取上清液于新的 1.5 mL离心管 | - | - |
| 上清液 | 40 | 40 |
| Working ReagentⅤ | 200 | 200 |
| 混匀,室温静置 5 min后,30℃水浴 30 min | - | - |
| 去离子水 | 200 | 200 |
4. 混匀,取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中,记录 520 nm处吸光值 A,分别记为 A 测定,A 标准和 A 空白。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白,ΔA 标准=A 标准-A 空白。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴,ΔA 标准为 y轴,绘制标准曲线,得到标准方程,将ΔA 测定代入方程得到 x (μg/mL)。
2. 肌酸含量的计算:
(1)按样本鲜重计算:
肌酸(μg/g 鲜重)=x×V 样总÷W×F=x÷W×F
(2)按样本体积计算:
肌酸(μg/mL)=x×F
V 样总:加入去离子水提取的体积,1 mL;W:样本质量;F:稀释倍数。
A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
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