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活动截止时间：2024年1月31日
Annexin V-AbFluor™ 405 细胞凋亡检测试剂盒（蓝色荧光）是一款基于Annexin V高亲和结合磷脂酰丝氨酸（PS）原理，配合PI核酸染料，通过蓝色/红色双荧光通道快速区分早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞的即用型试剂盒，专为流式细胞术与荧光显微镜场景下的细胞状态分析而设计。
细胞凋亡（apoptosis）是基因调控的细胞程序性死亡，对维持多细胞生物内环境稳态至关重要。在正常活细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）仅分布于细胞膜内侧；当细胞进入凋亡早期，PS会外翻至膜外侧，成为可被Annexin V特异性识别的“凋亡信号”。Annexin V-AbFluor™ 405在404 nm激发、431 nm发射的蓝色荧光下标记外翻的PS，从而指示早期凋亡细胞。
碘化丙啶（PI）为核酸染料，不能穿透完整细胞膜，但可进入膜完整性受损的晚期凋亡或坏死细胞，于535 nm激发、617 nm发射红色荧光。通过Annexin V-AbFluor™ 405与PI双染，可在单一样本中同时区分：
本试剂盒适用于细胞凋亡/周期研究，可广泛应用于：
| 中文名称 | Annexin V-AbFluor™ 405 细胞凋亡检测试剂盒(蓝色荧光) |
| 英文名称 | Annexin V-AbFluor™ 405 Apoptosis Detection kit (Blue Fluorescence) |
| 产品货号 | KTA0001 |
| 试剂盒组分 | • Annexin V 结合缓冲液(5x) • Annexin V- AbFluor™ 405 • Propidium Iodide (PI) |
| 保存建议 | 从发货之日起，4°C可稳定保存6个月。请避光保存，避免冰冻。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
| 组分 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| Annexin V Binding Buffer (5×) | 5 mL (50T) / 10 mL (100T) | 4℃ |
| Annexin V-AbFluor™ 405 | 250 μL (50T) / 500 μL (100T) | 4℃避光保存 |
| Propidium Iodide (PI) | 100 μL (50T) / 200 μL (100T) | 4℃避光保存 |
1×Annexin V Binding Buffer：用去离子水把Annexin V Binding Buffer (5×)稀释成1×。
Annexin V-AbFluor™ 405：即用型；使用前，平衡到室温。
Propidium Iodide (PI)：即用型；使用前，平衡到室温。
1. 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。
2. 4℃，300 g离心5 min收集1-2×105细胞，用冰预冷的PBS洗涤两次。
注意：贴壁细胞使用胰酶消化后离心收集细胞，消化时间如果过长，易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性，所以需控制胰酶消化时间。
3. 用100 μL 1×Annexin V Binding Buffer重悬细胞。
4. 每100 μL细胞悬液中加入4-5 μL Annexin V-AbFluor™ 405和1-2 μL PI，轻柔混匀。
5. 室温避光孵育15 min。
6. 孵育结束后加入400 μL 1×Annexin V Binding Buffer，轻柔混匀后置于冰上。染色后30 min内通过流式细胞仪分析细胞。使用404 nm和535 nm激发，431 nm和617 nm附近测量荧光。
1. 对于悬浮细胞：
(1) 按照步骤A.1到步骤A.6的流式细胞分析步骤。
(2) 将步骤A.6的细胞悬浮置于玻片上，用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分析细胞。
2. 对于贴壁细胞，按照以下操作步骤：
(1) 细胞接种于爬片或腔室载玻片上，培养细胞。
(2) 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。
(3) 除去培养基，用PBS洗涤细胞两次。
(4) 准备工作液：每100 μL 1×Annexin V Binding Buffer添加4-5 μL Annexin V-AbFluor™ 405和1-2 μL PI，轻柔混匀。
注意：最佳浓度可根据具体实验要求确定。
(5) 在细胞中加入适量的工作液（确保工作液完全覆盖细胞），室温避光孵育15-30 min (可以在冰上孵育，以减缓凋亡过程，但孵育时间需延长到至少30 min)。
(6) 用1×Annexin V Binding Buffer洗涤细胞两次。
注意：此步不要使用PBS洗涤细胞。
(7) 载玻片上添加一滴1×Annexin V Binding Buffer，然后将细胞爬片置于在载玻片上。对于细胞腔室载玻片上的细胞，添加足够的1×Annexin V Binding Buffer覆盖细胞。
注意：也可使用抗荧光淬灭封片剂封片。
(8) 使用适当的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。
A: 标记细胞凋亡早期。
杂志名称: Cell | 作者: Wang X, Liu Y, Wang Z, et al.
IF: 42.5012 | 发表时间: 2025
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