Q：细胞用反复冻融法处理的具体步骤是什么？
A：放在-80冻15min，迅速37度水浴5-10min，短暂涡旋，裂解细胞，提醒使用耐冻的离心管；如果样本量较少，5min即可完成冻/融（实际操作1mL细胞悬液）；核心是速冻速融，缓慢冷冻会形成大冰晶，主要存在于细胞外，导致细胞脱水但不易破碎；缓慢融化会重结晶，进一步破坏细胞结构，但速冻速融总体效率更高。
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A：放在-80冻15min，迅速37度水浴5-10min，短暂涡旋，裂解细胞，提醒使用耐冻的离心管；如果样本量较少，5min即可完成冻/融（实际操作1mL细胞悬液）；核心是速冻速融，缓慢冷冻会形成大冰晶，主要存在于细胞外，导致细胞脱水但不易破碎；缓慢融化会重结晶，进一步破坏细胞结构，但速冻速融总体效率更高。
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