Q:数值很低是什么原因?
A:一、转染效率低 方法:1、确保细胞状态是良好的,选择指数分裂期的细胞进行转染 2、可以选择过表达的荧光蛋白质粒作为阳性对照 3、转染试剂很重要,比如在做miRNA研究的实验中,如果Lipo2000或Lipo3000的转染效率不能满足的话,可以选择更换其它转染试剂 二、裂解不充分 方法:1、细胞培养时间不宜过长,最好不超过36h,培养时间过长的话,细胞难裂解 2、裂解液的量要足以充分裂解细胞 3、要是实验对象为烟草叶片的话,可以在EP管中加入液氮和预冷的小钢珠对叶片进行研磨 三、底物失效 方法:1、底物保存的时候要避光低温保存,尤其是腔肠素,推荐-80℃保存 2、反应工作液建议现配现用 四、操作问题(荧光素酶的半衰期一般约30min,加完底物后可立即检测,尽量在30min内完成
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