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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性检测试剂盒（微量法）是一款专为土壤样本设计的比色法试剂盒，通过测定对-硝基苯酚在410 nm处的吸光度变化，快速评估土壤芳基硫酸酯酶活性，为土壤硫循环与微生物功能研究提供可靠数据。
背景：土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）主要由土壤微生物分泌，可催化有机硫化物水解为植物可利用的无机硫酸盐，是硫素生物地球化学循环的关键限速酶，也是评价土壤生物学质量的重要指标。CheKine™ 土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性检测试剂盒（微量法）利用S-ASF催化底物对-硝基苯硫酸钾生成黄色产物对-硝基苯酚，其在410 nm处具有特征吸收峰，吸光度变化与酶活性成正比，从而实现对土壤样本中S-ASF活性的定量分析。
应用领域：土壤微生物生态研究、土壤质量评估、植物营养与硫循环机制探索、农业施肥策略优化及环境修复效果监测。
| 中文名称 | 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Soil Aryl Sulfatase (S-ASF) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB4054 |
| 检测类型 | 水土检测 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 土壤样本 |
| 试剂盒组分 | • Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent Ⅳ •Standard |
| 分子 | 土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF） |
| 检测指标 | 土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF） |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working Reagent II：临用前配制；根据用量，取一支 Reagent II 加入 3.5 mL去离子水，充分溶解备用；用不完的试剂 20℃分装避光保存一周，禁止反复冻融。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent Ⅳ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Standard：5 mM对硝基苯酚标准液，即用型；使用前，平衡到室温；4℃，避光保存。
注意：Reagent II 和 Standard有毒，建议在通风橱进行实验。
使用 5 mM对硝基苯酚标准液，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（mM） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 100 µL 5 mM Standard | 900 | 0.5 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (0.5 mM) | 500 | 0.25 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (0.25 mM) | 500 | 0.125 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (0.125 mM) | 500 | 0.0625 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (0.0625 mM) | 500 | 0.03125 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (0.03125 mM) | 500 | 0.01563 |
| Blank | 0 | 500 | 0（空白管） |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：推荐使用新鲜样本
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30-50目筛。
1.
酶标仪或可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 410 nm。可见分光光度计用去离子水调零。
2.
操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中进行）：
| 试剂 | 测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） |
|---|---|---|---|
| 风干土样（g） | 0.05 | 0.05 | 0 |
| 甲苯 | 12.5 | 12.5 | 0 |
| 振荡混匀，使土壤全部湿润，室温放置 15 min | - | - | - |
| ReagentⅠ | 200 | 200 | 0 |
| ReagentⅡ | 50 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 50 | 0 |
| 混匀，37℃水浴 1 h后 | - | - | - |
| Standard | 0 | 0 | 262.5 |
| Reagent III | 50 | 50 | 50 |
| Reagent Ⅳ | 200 | 200 | 200 |
| 充分混匀，室温静置 2 min后，10,000 g, 25℃离心 10 min，取 200 μL上清液至 96孔板或微量玻璃比色皿中，于 410 nm处测定吸光值，分别记为 A 测定、A 对照、A 标准和 A 空白，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照、ΔA 标准=A 标准-A 空白。 | - | - | - |
注意：标准曲线只需测定 1次，每个测定孔都需设置一个对照孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA 测定小于 0.1，可适当增大样本量，同步修改计算公式；如果ΔA 测定大于 0.5 mM的ΔA 标准，样本上清液可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1.
标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (mM)。
2.
S-ASF活性的计算：
单位的定义：每天每 g土样中产生 1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-ASF (U/g 土样)=x×V 反总÷W÷T=6.3×x÷W
T：反应时间，1 h=1/24 d；V 反总：反应体系总体积：0.2625 mL；W：样本质量，0.05 g。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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