活性氧(ROS)含量检测试剂盒(红色,流式细胞仪、荧光显微镜)-CheKine™

Name: 活性氧(ROS)含量检测试剂盒(红色,流式细胞仪、荧光显微镜)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1913
Price: 398 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Reactive Oxygen Species (ROS) Detection Fluorometric Assay Kit（Red, Flow Cytometry, Fluorescence Microscope）

产品货号

KTB1913

产品特点：

兼容流式细胞仪与荧光显微镜，满足不同实验场景需求

红色荧光信号灵敏度高、背景低，适合低丰度 ROS 检测

提供即用型 DHE (1000×) 与 ROS Positive Control (1000×)，简化实验流程

适用于活细胞与新鲜组织样本，保留生理状态下的 ROS 信息

避光-20 ℃稳定保存 12 个月，冰袋运输确保运输过程性能稳定

选择规格

50T

¥398

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100T

¥598

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（红色,流式细胞仪、荧光显微镜）是一款基于红色荧光探针 DHE 的荧光法检测工具，可快速、直观地监测活细胞或新鲜组织样本中活性氧（ROS）的相对水平，兼容流式细胞仪与荧光显微镜两种主流平台。

活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导和体内平衡中起重要作用。然而，在氧化应激相关状态下，ROS水平可以大大增加。ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病、糖尿病、骨质疏松症、中风、炎症性疾病、以及神经退行性疾病和癌症的研究发挥重要的作用。ROS检测将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。本试剂盒利用可穿透细胞膜的 DHE（Dihydroethidium）探针，在细胞内被 ROS 氧化后生成红色荧光产物，通过流式细胞仪（FL2 通道）或荧光显微镜（Ex/Em ≈ 535/610 nm）即可定量或半定量分析 ROS 水平。试剂盒同时提供 ROS Positive Control，便于在实验体系内建立阳性对照，验证检测系统可靠性。

应用领域：细胞代谢研究、氧化应激机制探索、药物筛选与毒性评价、炎症及神经退行性疾病模型构建、肿瘤微环境分析等以细胞为核心的基础与转化医学研究。

产品参数

中文名称	活性氧(ROS)含量检测试剂盒(红色,流式细胞仪、荧光显微镜)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Reactive Oxygen Species (ROS) Detection Fluorometric Assay Kit（Red, Flow Cytometry, Fluorescence Microscope）
产品货号	KTB1913
检测方法	荧光法
样本类型	活细胞、新鲜组织
试剂盒组分	•DHE (1000×) •ROS Positive Control (1000×)
检测范围	未提及
灵敏度	未提及
分子	活性氧
检测指标	活性氧
注意事项	预实验建议；样本均一化（推荐 BCA 法）；自行建标准曲线；安全防护（通风橱、手套等）
保存建议	避光-20℃，保存 12 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	生化试剂具刺激性/毒性

使用说明

*请在实验前检查各组分的量。

*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。

自备仪器与试剂

自备资源类型	资源名称	备注
仪器	荧光显微镜/流式细胞仪	配备 PE滤光片
耗材	6孔板/24孔板	普通透明细胞培养板
试剂	PBS（pH 7.4）/胰酶/无血清培养基	清洗细胞用/消化贴壁细胞/稀释刺激物或阳性对照或清洗细胞用
其他	37℃恒温细胞培养箱、离心机、可调节式移液枪及枪头	检测量较大时合理使用多通道移液器有助于提高实验效率

注意事项

正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
阳性对照推荐初始使用浓度为 1x（推荐浓度 0.5-2x，具体依细胞类型而定）。通常刺激后 30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后 30 min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
实验过程中，如果阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照 1:2000稀释荧光探针DHE，使DHE的终浓度为 0.5x。探针装载的时间可在 15-60 min内适当进行调整，尽量缩短读片时的曝光时间，并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
ROS Positive Control (1000×)仅用于作为阳性对照的样品，并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
探针装载后，一定要洗净未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
尽量缩短探针装载后到检测所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
DHE易在空气中氧化，请尽量避免暴露于空气中。DHE 脱氢后产生一定毒性的 Ethidium，请注意防护。
生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护，穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。
本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

实验流程

试剂准备

试剂名称	试剂准备	注意事项
DHE工作液	临用前配制，用 PBS或者无血清培养基将 DHE (1000×)稀释至 1×	实验过程中避光放置，可根据不同细胞调整 DHE浓度 0.5×-2×
阳性对照工作液	临用前配制，用无血清培养基将 ROS Positive Control (1000×)稀释至 1×，通常刺激 0.5-4h	可根据不同细胞调整阳性对照浓度和刺激时间
待检测试剂	使用无血清培养液将待测试剂稀释至所需浓度

实验步骤

注意：对于刺激时间较短（通常为 2 h以内）的细胞，建议先装载探针，后用活性氧阳性对照或感兴趣的药物刺激细胞；对于需要较长时间刺激（通常为 6 h以上）的细胞，建议先用活性氧阳性对照或感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针，此处仅提供后者的实验方法，具体步骤如下：

原位装载探针 (仅适用于贴壁细胞)

1. 细胞准备：检测前一天细胞铺板，对于 96 孔板每孔的细胞接种数量需控制在 100-10000 个，推荐每孔接种 2000-5000个细胞。

2. 药物诱导：去除细胞培养液，加入无血清培养液稀释的药物处理细胞，于 37℃细胞培养箱内避光孵育，实际诱导时间根据药物特性和细胞类型决定。

3. （选做）阳性对照：用无血清培养液稀释 ROS Positive Control (1000×)到 1×，加入细胞，37℃避光孵育 30 min-4 h。为提高活性氧水平，不同类型细胞刺激时间存在差异，例如：HeLa细胞需处理 2 h。

4. DHE工作液准备：用 PBS 或无血清培养液稀释 DHE (1000×)到 1×。

注意：DHE最优先的推荐终浓度为 1×，对大多数细胞都适用，但为了得到更理想的结果，对于不同类型的细胞请自行进行一定摸索，DHE的终浓度通常为 0.5-2×。

5. ROS探针装载：去除处理药物，用 PBS 或无血清培养液洗涤细胞 1-2 次，加入适当体积稀释好的 DHE工作液。需充分盖住细胞，例如：6孔板通常不少于 1 mL/孔，96 孔板通常不少于 100 μL/孔，37℃细胞培养箱内避光孵育 30 min。

6. 细胞清洗：用 PBS 或无血清培养液洗涤细胞 1-2次，以充分去除未进入细胞内的 DHE。

05-2-2 收集细胞后装载探针 (适用于贴壁细胞、悬浮细胞和新鲜组织)

1. 细胞准备：清洗并收集足量的生长状态良好的细胞；组织样本用胰酶或网筛制备成单细胞悬液。

2. 药物诱导：将收集好的细胞悬浮于适量稀释好的药物，于 37℃细胞培养箱内避光孵育，实际诱导时间可根据药物特性和细胞类型决定。

4. DHE工作液准备：用 PBS 或无血清培养液稀释 DHE (1000×)到 1×。

5. ROS探针装载：离心收集细胞去除处理药物，并用 PBS 或无血清培养液洗涤细胞 1-2 次，离心收集细胞，加入稀释好的 DHE 工作液，使其细胞密度为 1×106个/mL，37℃细胞培养箱内避光孵育 30 min。

6. 细胞清洗：用无血清细胞培养液洗涤细胞 1-2次，以充分去除未进入细胞内的 DHE。

结果检测

荧光显微镜检测

1. 贴壁生长细胞：按照 05-2-1步骤操作，细胞清洗后，在细胞培养孔中加适量的无血清细胞培养液或 PBS（以免细胞被晾干），在荧光显微镜下观察；悬浮生长细胞：按照 05-2-2步骤操作，取 25-50 μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片，在荧光显微镜下观察。

2. 荧光显微镜检测：选用 PE 滤光片观察荧光，去除背景观察荧光的变化。

流式细胞分析检测

1. 细胞处理：贴壁生长细胞：按照步骤操作，用胰酶消化制备细胞悬液；悬浮生长细胞：按照 05-2-2 步骤，直接收集细胞，用 0.5-1 mL PBS 重悬细胞(0.5-1x105/mL)。

2. 流式细胞分析：选择 PE 通道，实时或设置不同时间点检测刺激前后荧光的强弱。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

文献引用

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