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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UGP）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法设计的微量检测工具，可在体外快速测定细胞或组织裂解液中UGP的催化活性，为研究细胞糖核苷酸代谢、糖原合成及植物多糖合成通路提供关键数据。
UGP（UDP-Glucose Pyrophosphorylase）是糖代谢中连接葡萄糖-1-磷酸与UDP-葡萄糖的核心酶，催化可逆反应：UTP + Glucose-1-P ⇌ UDP-Glucose + PPi。该反应为后续糖原、纤维素、半乳糖脂及糖蛋白合成提供必需的糖基供体。本试剂盒通过监测反应产物UDP-葡萄糖的生成速率，间接反映UGP活性；反应体系中生成的还原型辅酶在特定波长下产生颜色变化，其吸光度变化与酶活性成正比。
适用于细胞代谢研究，可用于培养细胞、原代细胞及组织样本中UGP活性测定，广泛应用于糖原代谢紊乱机制、植物多糖合成通路及微生物发酵工程优化等方向。
| 中文名称 | 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro UDP-Glucose Pyrophosphosphprylase (UGP) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1344 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent IA •Reagent IB •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent Ⅳ •Reagent Ⅴ |
| 分子 | UGP |
| 检测指标 | UGP |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
注意：Extraction Buffer有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
Working ReagentⅠ：临用前配制；将 ReagentⅠ B全部转移至 ReagentⅠ A中，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
Reagent II：临用前配制；48 T加入 1.2 mL去离子水，96 T加入 2.4 mL去离子水，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
Reagent III：临用前配制；48 T加入 1.2 mL去离子水，96 T加入 2.4 mL去离子水，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
Reagent IV：临用前配制；48 T加入 1.2 mL去离子水，96 T加入 2.4 mL去离子水，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
Reagent V：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
1. 组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 细胞：收集 500万细胞到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞 30次（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
3. 血清（浆）等液体样本：直接检测。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3002的蛋白质定量试剂盒（Bradford法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或紫外光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 340 nm，紫外光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔 UV板或微量石英比色皿中依次操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 测定孔（μL） |
|---|---|---|
| Working ReagentⅠ | 100 | 100 |
| Reagent II | 20 | 20 |
| Reagent III | 20 | 20 |
| Reagent IV | 20 | 20 |
| Reagent V | 20 | 20 |
| 去离子水 | 20 | 0 |
| 样本 | 0 | 20 |
3. 充分混匀，记录 340 nm处 10 s时吸光值 A1，37℃反应 5 min记录 310 s时的吸光值 A2。测定孔记为 A 测定，空白孔记为 A 空白。
计算ΔA=(A2 测定-A1 测定)-(A2 空白-A1 空白)。
注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.05可适当加大样本量。如果ΔA大于 0.6，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。若ΔA出现负值，则说明样本中不含 UGP或已降解。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
(1) 按样本蛋白浓度计算：
酶活单位定义：每毫克蛋白每分钟消耗 1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
酶活单位定义：每克样本每分钟消耗 1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=321.54×ΔA÷W
(3) 按细胞数量计算
酶活单位定义：每 104细胞每分钟消耗 1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/104 cell)＝[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(n×V 样÷V 样总)÷T=321.54×ΔA÷n
(4) 按样本体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗 1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/mL)＝[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总)÷T=321.54×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L /mol /cm；d：96孔 UV板光径，0.5 cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；n：细胞数量，以万计。
将上述计算公式中光径 d：0.5 cm调整为 d：1 cm进行计算即可。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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